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人腹膜毛细血管内皮细胞提取物说明书

人腹膜毛细血管内皮细胞提取物说明书
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公司细胞现货供应,人腹膜毛细血管内皮细胞提取物说明书质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
  人腹膜毛细血管内皮细胞提取物说明书的详细资料:

我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌;部分产品现货,超低比价,产品名称货期短,价格优,售后齐全。

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人腹膜毛细血管内皮细胞提取物说明书

Human Peritoneal : Normal Peritoneal Capillary Endothelial Cell Derivatives

EYX99014

 

人腹膜毛细血管内皮细胞提取物【Human Peritoneal : Normal Peritoneal Capillary Endothelial Cell Derivatives

人腹膜毛细血管内皮细胞提取物是从人腹膜毛细血管内皮细胞提取的,人腹膜毛细血管内皮细胞从正常人腹膜组织制备。正常人腹膜组织采集自各地方医院,采集工作根据IRB HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。 

细胞培养方法:

1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项:

1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2.   加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。

质粒小量提取试剂盒0/Benzofuran-carboxylic acid4961-羧酸

植物组织基因组提取试剂盒0/Benzo8-crown ether1984苯并8-6-

动物组织基因组提取试剂盒0/Benzo5-crown 5-ether1984苯并5-5-

HRP-anti E-tag 抗体0ug/包装Benzo[b]thiophene-carboxylic acid63148苯并噻吩-羧酸

HRP-anti M13 单抗(GE0ug/包装Benzimidazole517苯并咪唑
Pemetrexed  中文名:培美曲塞二钠  分子式:C20H21N5O6    人氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)ELISAKit              

Pefloxacin mesylate  中文名:甲磺酸培氟沙星  分子式:C18H24FN3O6S    中文名称   方法   规格

Pazufloxacin mesilate  中文名:甲磺酸帕珠沙星  分子式:C17H19FN2O7S    人抗心0脂抗体IgA(ACA-IgA)ELISAKit  

Pazopanib  中文名:帕唑帕尼  分子式:C21H23N7O2S    人抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISAKit  

Paroxetine hydrochloride  中文名:盐酸帕罗西汀  分子式:C19H21ClFNO3    人抗心0脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISAKit
芸香柚皮苷(标准品)  Narirutin  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA检测试剂盒MouseMacrophage-DerivedChemokine,MDCELISAkit 96T/48T

泽泻醇B醋酸酯(标准品)  Alisol B 23-acetate  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒 ,英文名: MDC/CCL22 ELISA Kit

獐牙菜苷(标准品)  Sweroside  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠巨噬细胞来源趋化因子(MDC)ELISA试剂盒 ,英文名: MDC ELISA Kit

獐牙菜苦苷(标准品)  Swertiamarin  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP1α)ELISA试剂盒 ,英文名: MIP1α ELISA Kit

樟脑(标准品)  Camphor  质量规格:HPLC96%,标准品 小鼠巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA检测试剂盒MouseMacrophageInflammatoryProtein1α,MIP-1αELISAkit 96T/48T

芝麻林素(标准品)  Sesamolin  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA试剂盒 ,英文名: MIP-1α/CCL3 ELISA Kit

芝麻素  Sesamin  质量规格:HPLC98%BR 小鼠巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)ELISA试剂盒 ,英文名: MIP1β ELISA Kit

芝麻素(标准品)  Sesamin  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA检测试剂盒MouseMacrophageInflammatoryProtein1β,MIP-1βELISAkit 96T/48T

槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷(标准品)  Quercetin 3-O-glucoside-7-O-rhamnoside  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA试剂盒 ,英文名: MIP-1β/CCL4 ELISA Kit

知母皂苷A3(标准品)  Timosaponin A3  质量规格:HPLC(ELSD)>97%,标准品 小鼠巨噬细胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA试剂盒 ,英文名: MIP-1δ/CCL15 ELISA Kit
人腹膜毛细血管内皮细胞提取物说明书Stavudine  中文名:司他夫定  分子式:C10H12N2O4    植物RNA提取试剂盒(溶液法)   24ml

Stauntosaponin A  中文名:  分子式:C28H38O7    PlanNAplus   40ml

Stanozolol  中文名:康力龙  分子式:C21H32N2O    质粒大量提取试剂盒   5T

Stanolone  中文名:雄诺龙  分子式:C19H30O2    PlasmidMaxiKit   10T              

Sprengerinin C  中文名:  分子式:C44H70O16    植物草酸氧化酶(OxO)ELISA试剂盒

注意事项:

1. 接收到,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。 

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