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烟曲霉探针法荧光定量PCR试剂盒标准操作步骤
点击次数:178 更新时间:2024-04-22

烟曲霉探针法荧光定量PCR试剂盒标准操作步骤:


1.液氮充分研磨样品。


2.收集研磨成粉末的50mg样品,置于1.5ml离心管中。


3.加入350μl65℃预热的缓冲液IL,并加入20μl蛋白酶K剧烈地漩涡振荡,确保所有的组织团都分散均匀。


4.65℃水浴20-30min。水浴期间颠倒样品数次。


5.加入350μl氯仿,充分混匀,12,000 rpm(~13,400×g)离心5分钟。


6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml离心管中。注意确保不要打散沉淀团或把组织碎片也一起转移。


7.加入4μl RNase A,涡旋混匀。室温放置2min。


8.加入二分之一上清体积的缓冲液IB与等体积的无水乙醇,充分混匀。如:向300μl上清中加入150μl缓冲液IB与300μl无水乙醇。


9.把上述混匀的液体转移到吸附柱上。10,000×g离心1 min以结合DNA,弃去滤出液体。纯化柱*容量为750μl,如果混合液大于750μl,请分两次过柱。


10.将吸附柱重新套回收集管中,加入500μl缓冲液WB至柱子中,10,000×g离心1min,倒弃流出液;


11.将吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g离心1min,倒弃流出液;


注意:DNA Wash Buffer使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中,使用前须恢复到室温。


12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g离心1min,弃去流出液;


13.将吸附柱重新套回2ml收集管中,转速(>13000×g)离心空结合柱1min以干燥柱子的基质;这一步对下面的洗脱步骤至关重要。


14.将柱子置于1.5ml灭菌离心管,加入50-150μl65℃预热的洗脱缓冲液EB至柱子的膜中央。室温静置5min;

15. 室温下,离心(>13000)1min,以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。


产品仅用于科研如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。


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