植物原花青素测试盒的样本前处理,需根据样本类型选择对应操作流程,全程控制低温条件避免原花青素氧化降解,保障后续检测结果准确。 固体植物样本前处理 样本初制备:将新鲜植物组织冷冻干燥后,用粉碎机粉碎并过80目筛,准确称取0.1~1.0g样本粉末置于离心管中。 超声提取:向离心管中加入20mL 70%甲醇水溶液,涡旋振荡1min使样品充分分散,置于40℃超声提取仪中超声提取30min(功率300W,每隔10min振荡一次)。 离心收集:超声结束后以8000rpm转速离心15min,收集上清液;残渣中再次加入15mL 70%甲醇水溶液重复提取,合并两次上清液定容至50mL,得到原花青素粗提液。 纯化除杂:将粗提液过活化后的C18固相萃取柱,用5mL超纯水淋洗去除糖类、有机酸等水溶性杂质,再用10mL 50%丙酮水溶液洗脱原花青素,洗脱液经氮吹浓缩后用甲醇定容至10mL,经0.22μm有机相滤膜过滤后待测。 液体样本前处理 摇匀后准确移取10.00mL液体样本于50mL具塞离心管中,若样本浑浊,先经0.45μm滤膜过滤去除悬浮物。 后续提取、纯化步骤与固体样本流程一致,最终得到待测液。 生物类特殊样本前处理 血清/血浆:室温血液自然凝固10~20min,2000~3000rpm离心20min收集上清,若出现沉淀需再次离心。 尿液/胸腹水:无菌管收集后2000~3000rpm离心20min,收集上清待测。 细胞样本:检测细胞内原花青素时,用PBS稀释细胞悬液至100万/ml左右,反复冻融破碎细胞后,2000~3000rpm离心20min收集上清待测。 前处理关键注意事项 样本采集后需尽早完成提取,若不能立即实验,需置于-20℃密封保存,避免反复冻融。 禁止检测含NaN3的样本,NaN3会抑制后续显色反应中的辣根过氧化物酶活性,导致结果偏低。 全程尽量避光操作,避免原花青素被氧化降解,影响最终检测结果准确性。
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