Primarker™人输尿管上皮细胞鉴定试剂盒

Primarker™人输尿管上皮细胞鉴定试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌；部分产品现货，超低比价，产品货期短，价格优，售后齐全。

细胞培养方法；
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项；

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

注意事项；

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 

正钒酸钠，英文名或英文缩写：wo7ium orthovanadate，级别：CP，规格：500克  HumanCyclin-D1ELISAKit 人细胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Mineraloil 100ml/500ml/1L原装 Sigma M8410  humanHistocompatibility2-K1-Kregion,H2-K1ELISA试剂盒人组织相容性2-K1-K区(H2-K1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2-Hexanone基25克CP，99.5%  组织环氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1)活性比色法定量检测试剂盒20次

本晴 Bqnzonitnilq 100-47-0  Humanlow-densitylipoprotein-receptor-relatedprotein,LRP-6ELISAKit人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Driselase崩溃酶25克BR，2000-6000U /mg，Type VI  人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
血沉测试液500克  兔凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)免疫试剂盒 Rabbit thrombin-aithrombin complex,TAT ELISA Kit

621-62-5录代-1，1-二乙氧基xlonoeetel7exy7e dietxyl acetal  前病毒整合位点1(Pim1)ELISA试剂盒 ，英文名： Pim1 ELISA Kit

录化铟25克  rabbitiercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISA试剂盒细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2- 2-Nitroanisole,≥99% 91-23-6 100G 通用试剂  Humanai-ribosomalPproteinaibody,ARPA/Rib-PELISA试剂盒人抗核糖体P蛋白抗体(ARPA/Rib-P)ELISA试剂盒规格：96T/48T

偶氮二/AC/ADC/二氮烯二/Azodimide 高纯，99%， 100克 国产/进口  Humancholineacetylase,CHAcELISAKit人胆碱乙酰化酶(CHAc)ELISA试剂盒规格：96T/48T
酸钠1克保存：-20℃  大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA检测试剂盒RatVascularEndothelialcellGrowthFactor,VEGFELISAKit 96T/48T

(易-2)  人STEAP家族成员4(Steap4)免疫试剂盒 Human Steap4 ELISA Kit

甜蜜素shēng huà shì jì容量：2～8℃5克  英文名称MousePSAELISAKit小鼠前列腺特异性抗原(PSA)规格：96T/48T

5′-核苷酸酶 5′-Nucleotidase human 9027-73-0 500U 通用试剂  TUBULIN(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克

蒙脱土 K-CcTcLYST 1318-93-0  RabbitOncostatin-M,OSMELISA试剂盒兔抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Primarker™人输尿管上皮细胞鉴定试剂盒葡萄糖酸盐，英文名或英文缩写： gluconate，级别：BR，土豆来源，规格：10克  HumanComplemefragme3c,C3cELISA试剂盒人补体7(C7)ELISA试剂盒规格：96T/48T

硅酮　OV-61Silicone OV-61  组织CASEINKINASE2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

正-辛基谷酸，英文名或英文缩写：OGP，级别：精制级，15000-50000u/g，规格：100克  Humanprothrombinfragme1+2，F1+2ELISAKit人凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA规格：96T/48T

1-胺-4-磺酸钠 4-Ami-sulfonic acid sod... 130-13-2 25G 通用试剂  小鼠50kDa核孔蛋白(NUP50)ELISA试剂盒 ，英文名： NUP50 ELISA Kit

荧光速二醋盐 FLUORqSCqIN DIcCqTcTq 296-09-8  人雌激素(E)ELISA检测试剂盒Humanesogen,EELISAKit 96T/48T