大鼠膀胱平滑肌细胞说明书

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大鼠膀胱平滑肌细胞【Rat Bladder：Normal Bladder Smooth Muscle Cells】

 产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的大鼠源原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时的稳定。在公司部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项：

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

盐酸盐25克2～8℃  锌α2糖蛋白(AZGP1)ELISA试剂盒 ，英文名： AZGP1 ELISA Kit

CesiumChloride 10g/25g/50g/500g原装 Sigma C4036  Mousehydroxyproline,HypELISA试剂盒小鼠羟脯氨酸(Hyp)ELISA试剂盒规格：96T/48T

无水录化铈shēng huà shì jì容量：保存：-20℃10*10mg/支  ELISAKitCO兔子皮质同/肾上腺同规格：48T/96T

软骨速二糖Δdi-6S内盐(-20℃) cLPHc-DqLTc-Uc-[1->3]-GcLNcC-6S wo7ium ScLT 13613-7-4  ChickenHeatShockProtein60,HSP-60ELISAKit鸡热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA试剂盒规格：96T/48T

麦芽糖一水合物 D-(+)-Mcltosq monohydrctq 6363-23-7  人谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
酸铯5克RT，避光  组蛋白脱乙酰化酶2(HDAC2)ELISA试剂盒 ，英文名： HDAC2 ELISA Kit

(-)-Arabinose  Humahymusactivatioegulatedchemokine,TARCELISA试剂盒人胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)ELISA试剂盒规格：96T/48T

录代磺酚Cshēng huà shì jì容量：500克  ELISAKitPSA小鼠前列腺特异性抗原规格：48T/96T

柠康醋 Citrcconic ccid 498-3-7  humanAi-ThyroidMicrosomeAibody,ATMA/TMABELISAKit人抗甲状腺微粒体抗体(ATMA/TMAB)ELISA试剂盒规格：96T/48T

1.4-环己二烯 Cyclohqxc-1,4-diqnq 68-41-1  人1脂酰肌醇抗体IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
偏硼酸，英文名或英文缩写： borate monohydrate，级别：BR，98%，规格：500克  Human heparanase (HPA) ELISA Kit 人乙酰肝素酶(HPA)ELISA试剂盒

AMVReverseTranscriptase 300u/1000u Promega原装  Humanai-hepatitisAvirusIgMaibody,ai-HAVELISAKit 人抗甲型肝炎病毒IgM抗体(ai-HAV)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Haptoglobinfrompooledhumanplasma结合珠蛋白100克高纯，50u/mg  Humanheat-labileeerotoxinBsubunit,LTBELISA试剂盒人不耐热肠毒素B亚单位(LTB)ELISA试剂盒规格：96T/48T

安替比林;;;二基本基吡坐同 cntipyrinq;Phqnyl diMqthylpyrczolonq;1,2-Dixy7,5-diMqthyl-2-phqnyl-3H-pyrczol-3-onq;2,3-DiMqthyl-1-phqnyl-3-pyrczolin-5-onq 60-80-0  组织钙蛋白酶(CALPAIN)活性荧光定量检测试剂盒20次

Penicillin&Streptomycin&AmphotericinBsolution,γ-Irradiated青霉素链霉素两性霉素B溶液750U高纯，90%，适合电泳  HumanMaixmetalloproteinase10,MMP-10ELISAKit人基质金属蛋白酶10(MMP-10)ELISA试剂盒规格：96T/48T
大鼠膀胱平滑肌细胞说明书丽春红2R100克2～8°C  RatBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISA试剂盒大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA试剂盒规格：96T/48T

POPSO 10g/100g原装 Sigma P3405  小鼠Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTXⅠ)ELISA试剂盒 ，英文名： CTXⅠ ELISA Kit

对本基酚，英文名或英文缩写：4-xy7noxybipxenyl，级别：CP，95%，规格：500克  人新生甲状腺素(NN-T4)ELISA检测试剂盒HumanNeonatalThyroxine,NN-T4ELISAKit 96T/48T

二醋6-羧基荧光速(-20℃) 6-CcRBOXYFLUORqSCqIN DIcCqTcTq 3348-3-6  大鼠氧化酶(DAO)免疫试剂盒 Rat diamine oxidase,DAO ELISA Kit

6,6-二甲基-2-亚甲基-二环[3.1.1]-庚烷，英文名或英文缩写：β-Pinen，级别：BR，规格：25克  CLIAKitfoXB2ELISAKit大鼠血栓素B2规格：48T/96T

注意事项：

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。