小鼠食管平滑肌细胞提取物培养

小鼠食管平滑肌细胞提取物【Mouse Esophageal: Normal Esophageal Smooth Muscle Cell Derivatives】

小鼠食管平滑肌细胞提取物是从小鼠食管平滑肌细胞提取的，小鼠食管平滑肌细胞从正常小鼠食管组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌；部分产品现货，超低比价，产品名称货期短，价格优，售后齐全。

细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项：

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

注意事项：

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 

马布特罗 ELISA试剂盒96TMequindox132977乙酰甲喹

林可霉素ELISA试剂盒96TMepivacaine968甲哌卡因

萘啶酸 ELISA试剂盒96TMenthyl-(4-amino-oxoH-pyrimidin-yl)-[1,3]oxathiolane-carboxylic acid142

多拉菌素 ELISA试剂盒96TMenisdaurin677658

地塞米松 ELISA试剂盒96TMemantine hydrochloride4102盐酸美金刚胺
L-Aspartic acid  中文名：L-天门冬氨酸  分子式：C4H7NO4  度：98.0%  小鼠白介素17(IL-17)ELISA试剂盒           

3,3',4,4'-Benzophenone tetracarboxylic dianhydride  中文名：3,3',4,4'-二苯甲酮四甲酸二酐  分子式：C17H6O7  度：98.0%  小鼠白介素18(IL-18)ELISAKit  

1,2-Benzisothiazolin-3-one  中文名：1,2-苯并异噻唑-3-酮  分子式：C7H5NOS  度：98.0%  人凝血酶(TM)ELISAKit  

Benzoin methyl ether  中文名：安息香甲基醚  分子式：C15H14O2  度：98.0%  人凝血因子Ⅶ(FⅦ)ELISAKit  

Benzanthrone  中文名：苯并蒽酮  分子式：C17H10O  度：98.0%  人可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)ELISAKit
蓝[pH指示剂]  Bromochlorophenol Blue  质量规格：pH指示剂 人补体蛋白4(C4)试剂盒 Human Compleme 4,C4 ELISA Kit

乙基橙[pH指示剂]  Ethyl Orange  质量规格：pH指示剂 人补体蛋白5(C5)试剂盒 Human Compleme 5,C5 ELISA Kit

4-乙氧基橘红盐酸盐(>95.0%(T))  4-Ethoxychrysoidine Hydrochloride  质量规格：>95.0%(T) 人补体蛋白9(C9)试剂盒 Human C9 ELISA Kit

DAABD-Cl [=4-[2-(二甲氨基)乙氨基磺酰]-7-氯-2,1,3-苯并恶二唑  DAABD-Cl [=4-[2-(Dimethylamino)ethylaminosulfonyl]-7-chloro-2,1,3-benzoxadiazole]  质量规格：用于蛋白质组分析，用于高效液相色谱标记，荧光染料，用于质谱的衍生化试剂 人补体片段3b受体(C3bR)试剂盒 Human C3bR ELISA Kit

2,3-萘二醛(>99.0%(GC))  2,3-Naphthalenedialdehyde  质量规格：>99.0%(GC) 人补体片段3c(C3c)试剂盒 Human Compleme fragme 3c,C3c ELISA Kit

DBD-F [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并恶二唑](>98.0%(HPLC))  DBD-F [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole]   质量规格：>98.0%(HPLC) 人补体片段3d(C3d)试剂盒 Human Compleme Fragme 3d,C3d ELISA Kit

N-(1-芘基)马来(>97.0%(HPLC))  N-(1-Pyrenyl)maleimide  质量规格：>97.0%(HPLC) 人补体片段4d(C4d)试剂盒 Human Compleme Fragme 4d,C4d ELISA Kit

爱维莫潘  Alvimopan  质量规格：删除；精神管制 人补体片断3a(C3a)试剂盒 Human Compleme fragme 3a,C3a ELISA Kit

3-磺炳基十四烷基二甲甜菜碱  Myristyl sulfobetaine  质量规格：>98.0%,BR 人补体片断3b(C3b)ELISA检测试剂盒HumanComplemefragme3b,C3bELISAKit 96T/48T

3-磺炳基十六烷基二甲甜菜碱  3-(N,N-Dimethylpalmitylammonio)propanesulfonate(SHDAB)  质量规格：>98%,BR 人补体片断3b(C3b)试剂盒 Human Compleme fragme 3b,C3b ELISA Kit
小鼠食管平滑肌细胞提取物培养红细胞NADH高铁血红蛋白还原酶测试盒   Erythrocyte NADH high iron hemoglobin reductase test kit                 4,5-Di-O-caffeoylquinic acid methyl ester  中文名：4,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯  分子式：C26H26O12 

红细胞NADH高铁血红蛋白还原酶测定试剂盒（比色法）  Repaglinide ethyl ester  147770-06-7  中文名：  分子式：C29H40N2O4  度：98.0%  关键词： 

核转录因子NF-KB   英文名称：   Nuclear anscription Factor NF-KB   规格：   48T/96T   英文缩写：   NF-KB  Tetracaine  94-24-6  中文名：丁卡因  分子式：C15H24N2O2 

河蟹5羟色胺   英文名称：   5-Hydroxyyptamine   规格：   48T/96T   英文缩写：   5-HT  Aspartame  22839-47-0  中文名：阿司帕坦  分子式：C14H18N2O5 

海藻糖含量试剂盒   可见分光光度法   50管/48样  Withanolide C  108030-78-0  中文名：醉茄内酯C  分子式：C28H39ClO7  度：97.5%  关键词：  细胞毒活性; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库