PrimaCell™人心肌细胞试剂盒培养

PrimaCell™人心肌细胞试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

小鼠组织蛋白酶G(CTSG)ELISA试剂盒 ，英文名： CTSG ELISA Kit  19121-58-5澳洲茄碱规格  Solasonine

绵羊主要组织相容性复合体(MHC)ELISA检测试剂盒Sheepmajorhistocompatibilitycomplex,MHCELISAKit 96T/48T  32981-86-510-脱乙酰基巴卡丁III  Deacetylbaccatin III

犬胰岛素样生长因子1(IGF1)试剂盒 Dog insulin-like growth factor 1,IGF1 ELISA kit  27548-93-2巴卡亭Ⅲ说明书  baccatin Ⅲ

英文名称MouseAGRPELISAKit小鼠Agoi相关蛋白(AGRP)ELISA试剂盒规格：96T/48T  26091-79-2白当归脑品牌  Byakangelicol

薄层色谱分析20样本  19573-01-4白当归素规格  Byakangelicin
906-33-2新绿原酸说明书  Neochlorogenic acid  组织二(MDA)比色法定量检测试剂盒50/100

905-99-7隐绿原酸品牌  Cryptochlorogenic acid  组织短链脂酰辅酶A脱氢酶(ACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量检测试剂盒20

90332-66-47-木糖基-紫杉醇规格  7-xylosyltaxol   组织短链脂酰辅酶A合成酶(ACYLCOASYHETASE)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20

8-乙氧基滇乌碱品牌  8-O-ethylyunaconitine   组织短链烯脂酰辅酶A水合酶(ENOYLCOAHYDRATASE)活性比色法定量检测试剂盒20

89590-98-7罗汉果苷VI品牌  Mogroside VI   组织丁酰胆碱酯酶活性荧光定量检测试剂盒20
RatAngiopoietin4,ANG-4ELISAKit大鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA试剂盒规格：96T/48T  30045-16-0脱氢紫堇碱  Dehydrocorydaline

载玻片细胞样品细胞色素C蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  518-69-4延胡索甲素说明书  （+）- Corydaline

Mouseadvancedglycationendproducts,AGEsELISA试剂盒小鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA试剂盒规格：96T/48T  437-64-9芫花素品牌  Genkwanin

小鼠载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒 ，英文名： apo-B100 ELISA Kit  529-53-3野黄芩素规格  Scutellarein

小鼠抗心1脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISA检测试剂盒Mouseai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISAKit 96T/48T  480-39-7乔松素  Pinocembrin
PrimaCell™人心肌细胞试剂盒培养133-05-1细辛脂素  Asarinin   英文名称RatFSHELISAKit大鼠促卵泡素(FSH)规格：96T/48T

133-04-0细辛脂素  Asarinin  英文名称RatFSHELISAKit大鼠促卵泡素(FSH)规格：96T/48T

13241-33-3新橙皮苷说明书  Neohesperidin   英文名称RatFSHELISAKit大鼠促卵泡生长激素(RatFSH)规格：96T/48T

13241-33-3新橙皮苷规格  Neohesperidin  英文名称RatFSHELISAKit大鼠促卵泡生长激素(RatFSH)规格：96T/48T

13241-28-6大黄酚-8-O-葡萄糖苷品牌  Chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside   英文名称RatFree-TestoteroneELISAKit大鼠游离睾同(Free-Testoterone)规格：96T/48T

运输和保存；
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。