实时荧光定量PCR: 实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的: 1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性*,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。 外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量准确,重现性的定量方法,已得到*的*,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。 产品名称 | 英文名称 | 货号 | 葡萄孢菌探针法荧光定量PCR试剂盒直销 | Botrytis cinerea | EY-P6461 |
荧光化学物质: 实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下: 1. TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析,又可分析基因突变(SNP),有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。 2. SYBR荧光染料:在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。SYBR仅与双链DNA进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定PCR反应是否特异。 3. 分子信标:是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近,不会产生荧光。PCR产物生成后,退火过程中,分子信标中间部分与特定DNA序列配对,荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
荧光定量PCR服务: 公司推出,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片,siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务,全部实验皆使用进口试剂完成,主要定量PCR仪器。 1、荧光定量PCR服务要求: (01)请您提供新鲜的且尽量多的材料;或直接提供纯化好的总RNA(大于 5 ug/样品);或直接提供纯化好的DNA(大于 5 ug/样品)。 (02)请提供已知的全长基因序列。 (03)请提供尽可能详细的背景资料:DNA/RNA 来源等 2、荧光定量PCR操作程序 (01)引物(探针)设计与合成。 (02)提取DNA/RNA,样本逆转录成cDNA。 (03)进行Real Time PCR实验,进行实验结果分析。 (04)实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料。 3、荧光定量PCR的收费标准: 我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。 几种传统荧光定量PCR方法简介: 1)内参照法: 在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。 2)竞争法: 选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。 3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。 油酸铝1公斤 HumanIerferonα/βReceptor,IFN-α/βRELISAKit 人α/β干扰素受体(IFN-α/βR)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 TetracyclineHCl 10g原装/25g原装 INALCO1758-9302 HumanLebtospiraIgMELISA试剂盒人钩端螺旋体IgM(Lebtospira)ELISA试剂盒规格:96T/48T 免疫血清兔抗小鼠κ-链shēng huà shì jì容量:25克 组织络氨酸酶(TP)活性荧光定量检测试剂盒20次 4-基咪坐;5-基咪坐;4-基甘噁啉 4-MqthyliMidczolq;4-Mqthylglyoxclinq 8-36-6 Humaninsulin-likegrowthfactors1,IGF-1ELISAKit人胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T 录化铷shēng huà shì jì容量:1克 人胰蛋白酶(ypsin)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 四环素鉴定琼脂500毫升 Humancardioophln1,CT-1ELISAKit人心肌营养素1(CT-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T 10039-54-0羟胺xy7noxylamine sulfate 人ICE蛋白酶激活因子(IRAP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 称量纸100毫克 兔氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)免疫试剂盒 Rabbit oxidized lowdensity lipoprotein aibody,OLAb ELISA Kit 仲丁醚 sec-Butyl ,96% 6863-58-7 5ML 通用试剂 桥粒芯糖蛋白2(DSG2)ELISA试剂盒 ,英文名: DSG2 ELISA Kit 本二加醋二烯炳酯 Dicllyl phthclctq 131-17-9 rabbitEndostatin,ESELISA试剂盒兔子内皮抑素(ES)ELISA试剂盒规格:96T/48T 硫化shēng huà shì jì容量:100克 HumanAicenomereAibody,ACA/CENPELISA试剂盒人抗着丝点抗体(ACA/CENP)ELISA试剂盒规格:96T/48T 54723-94-31钼酸铵AMMONIUM PHOSPHOMOLYBDATE HYDRATE HumanBlockingaibody,BAELISAKit人封闭抗体(BA)ELISA试剂盒规格:96T/48T 三氧化锑shēng huà shì jì容量:25克 人α1微球蛋白(α1-MG)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 3,5-二苯 3,5-Difluoroanisole,97% 93343-10-3 1G 通用试剂 兔子β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)免疫试剂盒 Rabbit β-Thromboglobulin,β-TG ELISA Kit 癸二醋二酯;皮脂醋二酯 DiMqthyl sqbccctq 106-79-6 热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA试剂盒 ,英文名: Hsp-60 ELISA Kit 放现菌肉汤培养基支RT 犬转移生长因子β1(TGF-β1)免疫试剂盒 Dog ansforming growth factor β1,TGF-β1 ELISA Kit (鱼精DNA) 英文名称MouseCCL1ELISAKit小鼠CCL1规格:96T/48T 低熔点琼脂糖shēng huà shì jì容量:2~8℃1克 冰冻切片组织细胞色素C氧化酶表达免疫荧光检测试剂盒10/20次 软骨速酶 (-20℃) CHONDROITINcSq cBC 904-13-9 ratEsadiolreceptor,ERELISA试剂盒大鼠葡萄孢菌探针法荧光定量PCR试剂盒直销雌二醇受体(ER)ELISA试剂盒规格:96T/48T DL-苹果酸 DL-Malic acid (≥98%) 6915-15-7 25G 通用试剂 小鼠CD5抗原样蛋白(CD5L)ELISA试剂盒 ,英文名: CD5L ELISA Kit |