产品名称 | 英文名称 | 货号 | 鲍疱疹样病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 | Abalone Herpes-like Virus(AbHV) | EY-P6322 |
实时荧光定量PCR: 实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的: 1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性*,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。 外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量准确,重现性的定量方法,已得到*的*,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。 荧光化学物质: 实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下: 1. TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析,又可分析基因突变(SNP),有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。 2. SYBR荧光染料:在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。SYBR仅与双链DNA进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定PCR反应是否特异。 3. 分子信标:是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近,不会产生荧光。PCR产物生成后,退火过程中,分子信标中间部分与特定DNA序列配对,荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
荧光定量PCR服务: 公司推出,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片,siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务,全部实验皆使用进口试剂完成,主要定量PCR仪器。 1、荧光定量PCR服务要求: (01)请您提供新鲜的且尽量多的材料;或直接提供纯化好的总RNA(大于 5 ug/样品);或直接提供纯化好的DNA(大于 5 ug/样品)。 (02)请提供已知的全长基因序列。 (03)请提供尽可能详细的背景资料:DNA/RNA 来源等 2、荧光定量PCR操作程序 (01)引物(探针)设计与合成。 (02)提取DNA/RNA,样本逆转录成cDNA。 (03)进行Real Time PCR实验,进行实验结果分析。 (04)实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料。 3、荧光定量PCR的收费标准: 我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。 腺病毒B型探针法荧光定量PCR试剂盒 Adenovirus(AV) 腺病毒C型探针法荧光定量PCR试剂盒 Adenovirus(AV) 腺病毒D型探针法荧光定量PCR试剂盒 Adenovirus(AV) 腺病毒E型探针法荧光定量PCR试剂盒 Adenovirus(AV) 腺病毒F型探针法荧光定量PCR试剂盒 Adenovirus(AV) 腺病毒通用探针法荧光定量PCR试剂盒 Adenovirus(AV) 嗜水气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒 Aeromonas hydrophila 斑点气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒 Aeromonas punctata 灭鲑气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒 Aeromonas salmonicida 温和气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒 Aeromonas sobria 气单胞菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒 Aeromonas spp. 蜂房小甲虫探针法荧光定量PCR试剂盒 Aethina tumida 阿菲波菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 Afipia spp. 非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 African Swine Fever Virus(ASFV) 放线共生放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 Aggregatibacter actinomycetemcomitans 荚膜阿耶罗菌探针法荧光定量PCR试剂盒 Ajellomyces capsulate 类天花病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 Alastrim Virus 粪产碱杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 Alcaligenes faecalis 1(RT-1狷羚疱疹病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒 Alcelephine Herpesvirus 1(AlHV-11 阿留申病病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 Aleutian Disease Virus(ADV) 交链孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 Alternaria spp. 鹅裂口线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 Amidostomum anseri 拟无枝菌酸菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒 Amycolaptosis spp. 自养无枝酸菌探针法荧光定量PCR试剂盒 Amycolata autotrophica 中央无浆体(无形体)探针法荧光定量PCR试剂盒 Anaplasma centrale 边缘无浆体(无形体)探针法荧光定量PCR试剂盒 Anaplasma marginale 嗜吞噬细胞无浆体(无形体)探针法荧光定量PCR试剂盒 Anaplasma phagocytophilum 无浆体(无形体)通用探针法荧光定量PCR试剂盒 Anaplasma spp. 十二指肠钩口线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 Ancylostoma duodenale Mouse receptor activator of nuclear factor kappaB ligand ELISA Kit 96T/48T 小鼠核因子活化因子受体配体(RANKL) Mouse TpP ELISA Kit 96T/48T 小鼠血栓前体蛋白(TpP) Mouse GnRH ELISA Kit 96T/48T Mouse inhibin B ELISA Kit 96T/48T 小鼠抑制素B(INH B0 Mouse thyrotropin-releasing hormone ELISA KIT 96T/48T 小鼠促甲状腺素释放激素(TRH) Mouse CRH ELISA Kit 96T/48T 小鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH) Mouse Insulin Receptor β(ISR-β)ELISA KIT 96T/48T 小鼠胰岛素受体β(ISR-β) Mouse HbA1c ELISA Kit 96T/48T 小鼠糖化血红蛋白(HbA1c) Mouse lymphocyte function associated antigen-3 ELISA Kit 96T/48T 小鼠LFA-3(CD58) Mouse HLA-2 ELISA Kit 96T/48T 小鼠组织相容性抗原(HLA-2) Mouse HLA-1 ELISA Kit 96T/48T 小鼠组织相容性抗原(HLA-1) Mouse Bone morphogenetic protein 7 ELISA Kit 96T/48T 小鼠骨成型蛋白质7(BMP-7) Mouse HA ELISA Kit 96T/48T 小鼠透明质酸(HA) Mouse 25(OH)D3 ELISA Kit 96T/48T Mouse Myoglobin ELISA Kit 96T/48T 小鼠肌红蛋白(MYO) Mouse Thromboxane B2 ELISA Kit 96T/48T 小鼠血栓素(TXB2) Mouse acetylcholine ELISA Kit 96T/48T Mouse Tissue Polypeptide Antigen ELISA Kit 96T/48T 小鼠组织多肽抗原(TPA) 鲍疱疹样病毒探针法荧光定量PCR试剂盒Mouse t-PA ELISA Kit 96T/48T 小鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA) Mouse β-Thromboglobulin ELISA Kit 96T/48T 小鼠β血小板球蛋白(β-TG) Mouse dihy-drotestosterone ELISA Kit 96T/48T 小鼠双氢睾酮(DHT)ELISA试剂盒 Mouse SPE(IgG,M) ELISA Kit 96T/48T 小鼠抗抗体(SPE) Mouse Epinephrine ELISA Kit 96T/48T 小鼠肾上腺素(Epinephrine) Mouse Noradrenalin ELISA Kit 96T/48T Mouse PGE1 Elisa kit 96T/48T 小鼠前列腺素E1(PGE1) 几种传统荧光定量PCR方法简介: 1)内参照法: 在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。 2)竞争法: 选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。 3)PCR-ELISA法: 利用或等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗或酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
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