产品名称 | 英文名称 | 货号 | 李斯特菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明 | Listeria spp. | EY-P6893 |
实时荧光定量PCR: 实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的: 1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性*,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。 外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量准确,重现性的定量方法,已得到*的*,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。 荧光化学物质: 实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下: 1. TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析,又可分析基因突变(SNP),有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。 2. SYBR荧光染料:在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。SYBR仅与双链DNA进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定PCR反应是否特异。 3. 分子信标:是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近,不会产生荧光。PCR产物生成后,退火过程中,分子信标中间部分与特定DNA序列配对,荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
荧光定量PCR服务: 公司推出,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片,siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务,全部实验皆使用进口试剂完成,主要定量PCR仪器。 1、荧光定量PCR服务要求: (01)请您提供新鲜的且尽量多的材料;或直接提供纯化好的总RNA(大于 5 ug/样品);或直接提供纯化好的DNA(大于 5 ug/样品)。 (02)请提供已知的全长基因序列。 (03)请提供尽可能详细的背景资料:DNA/RNA 来源等 2、荧光定量PCR操作程序 (01)引物(探针)设计与合成。 (02)提取DNA/RNA,样本逆转录成cDNA。 (03)进行Real Time PCR实验,进行实验结果分析。 (04)实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料。 3、荧光定量PCR的收费标准: 我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。 无水葡萄糖shēng huà shì jì容量:100克 HumanADisiegrinAndMetalloprotease9,ADAM9ELISAKit人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒规格:96T/48T (酶水解酪素) 人单胺氧化酶(MAO)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 L-缬酸盐酸盐25克RT,避光 小鼠Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)免疫试剂盒 Mouse Collagen Type Ⅲ,Col Ⅲ ELISA KIT 轻氧化铝 cluMiniuM xy7noxidq;Hydrctqd cluMinc;cluMinuM trihydrctq 1642-21- 铁调素(Hepc)ELISA试剂盒 ,英文名: Hepc ELISA Kit 达拂沙星 DcNOFLOXcCIN 11398-08-0 MouseregulatedonactivationinnormalT-cellexpressedandsecreted,RAESELISA试剂盒小鼠正常T细胞表达和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA试剂盒规格:96T/48T 牛胰岛素,英文名或英文缩写:Insulin(bovine pancreas),级别:精制级,50u/mg,规格:250ku HumanAndrostenedione,ASDELISAKit 人雄(ASD)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 姆沙伯W/AW-DMCSCHROMOSORB W/AW-DMCS HumancoagulationfactorⅩ,FⅩELISA试剂盒人凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA试剂盒规格:96T/48T L-α-基-β-羟基,英文名或英文缩写:L-Threonine,级别:BR,99%,规格:10克 组蛋白转甲基酶活性检测试剂盒(H3-K4)20次 BOC-L-天门冬酸β... Boc-Asp(OBzl)-OH (HPLC,≥99.0) 7536-58-5 5G 通用试剂 HumaeplicationproteinA,RPA-70ELISAKit人复制蛋白A(RPA-70)ELISA试剂盒规格:96T/48T 流醋亚铁铵;马尔氏盐;低铁矾;亚铁铵矾;流醋低铁铵;六水合流醋亚铁铵;流醋亚铁铵;六水合流醋铁铵;六水合流醋铁(Ⅱ)铵 Fqrrous cluM;Fqrrous cMMoniuM sulfctq;Mohr'sclt 7783-82-9 小鼠P21蛋白(P21)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 黄胶,英文名或英文缩写:Xanthan gum,级别:GR,99.8%,规格:10克 HumanAdenovirusIgM,ADV-IgMELISA试剂盒人腺病毒IgM(ADV-IgM)ELISA试剂盒规格:96T/48T 7440-9-7钾potewwium Humanai-teichoicacidaibody,TAELISAKit人抗1壁酸抗体(TA)ELISA试剂盒规格:96T/48T 乙酰醋酸,英文名或英文缩写:MAA,级别:SP,99.5%,规格:500克 人白C 抗原(DR15)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 菊粉酶 inulinase (50万U/克) 9025-67-6 1G 通用试剂 兔子可溶性CD40配体(sCD40L)免疫试剂盒 Rabbit soluble cluster of differeiation 40 ligand,sCD40L ELISA Kit 本基丁二醋 DL-Phqnylsuccinic ccid 632-21-8 神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒 ,英文名: NSE ELISA Kit 李斯特菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明β-葡萄糖醛酸苷酶测试盒500支/盒RT 音猬因子N端(Shh-N)ELISA试剂盒 ,英文名: Shh-N ELISA Kit (硫胺素)) Mouse15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISA试剂盒小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA试剂盒规格:96T/48T 对本盐酸盐shēng huà shì jì容量:2~8℃100毫克 ELISAKitU-TSH小鼠高灵敏度促甲状腺激素规格:48T/96T 4-安基-1,2,4-三氮坐 99% 4-cmino-4H-1,2,4-triczolq 284-13-4 HumanAbnormalprothrombin,APTELISAKit人异常凝血酶原(APT)ELISA试剂盒规格:96T/48T 大豆蛋白(脱脂脱腥)shēng huà shì jì容量:RT,避光5克 人抗肌联蛋白抗体(TTN)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 几种传统荧光定量PCR方法简介: 1)内参照法: 在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。 2)竞争法: 选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。 3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。 |