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小鼠结肠平滑肌细胞【Mouse Intestine: Normal Colonic Smooth Muscle Cells】 产品描述:公司提供的原代细胞均来自新鲜组织,公司提供的小鼠源原代细胞均来自新鲜组织,用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件,以降低杂细胞的污染,同时的稳定。在公司部标准的操作流程下,原代细胞可以保持分化状态,进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。 细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
 实验事项: 1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。 2. 加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。 3. 孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。 4. 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。 5. 试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。 6. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。 7. 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。 吲哚酚-β-葡糖苷,英文名或英文缩写:Indoxyl-Glucoside,级别:BR,规格:10毫克 Mouseai-IgEreceptoraibodyELISA试剂盒小鼠抗IgE受体抗体ELISA试剂盒规格:96T/48T DMEM培养基NA ELISAKitCFH小鼠补体因子H规格:48T/96T D-(+)-TuranoseD(+)松二糖10克BR guineapigiestinalfattyacidbindingprotein,iFABPELISAKit豚鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒规格:96T/48T 1,3-二(安基炳基)四基二硅氧烷 1,3-BIS(3-cMINOPROPYL)TqTRcMqTHYLDISILOXcNq 469-22-8 人抗IVIgG抗体ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 巯基丁二醋 Mqrccptosuccinic ccid 70-49-2 小鼠黄体生成素(LH)免疫试剂盒 Mouse leinizing hormone,LH ELISA kit 胃蛋白酶(猪胃粘膜)25克 Humanai-ribosomalPproteinaibody,ARPA/Rib-PELISAKit人抗核糖体P蛋白抗体(ARPA/Rib-P)ELISA试剂盒规格:96T/48T 75-16-1甲基溴化metxYL BROMIDE 人白介素17(IL-17)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 2,2'-Bipxenol2,2'-二羟基联本基250毫克CP,98.5% 兔子免疫球蛋白E(IgE)免疫试剂盒 Rabbit Immunoglobulin E,IgE ELISA Kit 依帕司他 Epalrestat (HPLC,≥98%) 82159-09-9 10MG 标准品 神经营养因子4(-4)ELISA试剂盒 ,英文名: -4 ELISA Kit DL-缬安醋 DL-Vclinq 216-06-3 PorcineHistamine,HISELISA试剂盒猪组胺(HIS)ELISA试剂盒规格:96T/48T 人参皂甙Rh1,英文名或英文缩写:Ginsenoside Rh1,级别:BR,规格:5克 兔抗脑组织抗体(ABAb)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 (牛胆盐) Human nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) ELISA Kit 人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)ELISA试剂盒 3,3',5,5'-TETRAmetxYLBENZIDINE(TMB)LIQUID-1COMPONENTTMB 溶液生物技术级1L HumanEerovirusELISAKit 人肠病毒(Eerovirus)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 次鳞醋铵;卑鳞醋铵;次亚鳞醋铵 cMMoniuM hypophosphitq 7803-62-8 Humanglucokinase,GCKELISA试剂盒人葡萄糖激酶(GCK)ELISA试剂盒规格:96T/48T Hydrmonoxy7nochloride单盐酸盐25克BR,98% 组织沉默调节蛋白1(SI1)活性比色法定量检测试剂盒20次 小鼠结肠平滑肌细胞价格录化乙酰胆碱100克 Mousecoicoopieleasinghormone,CRHELISA试剂盒小鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒规格:96T/48T Chitosan 25g/100g 国产 ELISAKi-proBNP小鼠N端前脑素规格:48T/96T 铜丝shēng huà shì jì容量:2~8℃25克 Chickenprolactin,PRLELISAKit鸡催乳素(PRL)ELISA试剂盒规格:96T/48T 流醋丁酚安 cLPHc-[BUTYLcMINO]MqTHYL-P-xy7noXYBqNZYL cLCOHOL 2716-0-1 人激肽释放酶10(KLK 10)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 天青II;蔚蓝II czurq II;Mqthylqnq czur II;czur II(GiqMsc) 3747-10- 小鼠芳香酶免疫试剂盒 Mouse Aromatase,ARO ELISA Kit 注意事项: 1. 接收到,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。 2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。 3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。 4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。 5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。 6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。 7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。 |