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大鼠脑动脉血管内皮细胞提取物培养

大鼠脑动脉血管内皮细胞提取物培养
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大鼠脑动脉血管内皮细胞提取物培养在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
  大鼠脑动脉血管内皮细胞提取物培养的详细资料:

产品名称

大鼠脑动脉血管内皮细胞提取物培养

英文名称

Rat Brain : Normal Cerebral Vascular Endothelial Cells Derivatives

货号

EYX99241

大鼠脑动脉血管内皮细胞提取物【Rat Brain : Normal Cerebral Vascular Endothelial Cells Derivatives

大鼠脑动脉血管内皮细胞提取物是从大鼠原代脑动脉血管内皮细胞提取的,大鼠原代脑动脉血管内皮细胞从正常大鼠脑组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。

 

 实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

 

操作要点:

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

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Human heparin binding epidermal growth factor (HB-EGF) ELISA Kit 人肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)ELISA试剂盒  2-[(Acetylthio)methyl]-phenylpropionic acid  91702-98-6  中文名:  分子式:C12H14O3S 

Human hea fatty acid binding protein (h-FABP) ELISA Kit 人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)ELISA试剂盒  (Z)-Lachnophyllum lactone  81122-95-4  中文名:  分子式:C10H10O2 

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天麻素  Gastrodin  质量规格:HPLC98%BR 小鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒 ,英文名: TIMP-1 ELISA Kit

甜菊苷(标准品)  Stevioside  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA检测试剂盒Mousetissueinhibitorsofmetalloproteinase2,TIMP-2ELISAkit 96T/48T

土贝母苷甲(标准品)  Tubeimoside I  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA试剂盒 ,英文名: TIMP-2 ELISA Kit

土荆皮乙酸(标准品)  Pseudolaric Acid B  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA检测试剂盒Mousetissueinhibitorsofmetalloproteinase3,TIMP-3ELISAkit 96T/48T

土木香内酯(标准品)  Alantolactone  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA试剂盒 ,英文名: TIMP-3 ELISA Kit

蜕皮激素(标准品)  Ecdysterone  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA检测试剂盒Mousetissueinhibitorsofmetalloproteinase4,TIMP-4ELISAkit 96T/48T

脱水穿心莲内酯(标准品)  Dehydroandrographolide  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA试剂盒 ,英文名: TIMP-4 ELISA Kit

脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(标准品)  Dehydroandrographolide succinate  质量规格:HPLC99%,标准品 小鼠基质细胞衍生因子1(SDF1)ELISA试剂盒 ,英文名: SDF1 ELISA Kit

脱水羊藿素(标准品)  Anhydroicaritin  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA检测试剂盒MouseSomalcellderivedfactor1a,SDF-1aELISAKit 96T/48T

脱氧野尻霉素(标准品)  1-Deoxynojirimycin  质量规格:HPLC98%,标准品 小鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒 ,英文名: SDF-1a/CXCL12 ELISA Kit
大鼠脑动脉血管内皮细胞提取物培养人转化生长因子α(TGF-α)ELISAKit     2-Methylanthraquinone  84-54-8  中文名:2-甲基蒽醌  分子式:C15H10O2  度:98.0%  关键词: 

人主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHC/HLA-)ELISA试剂盒     2-Methylsulfanylpyrimidin-4(3H)-one  5751-20-2  中文名:  分子式:C5H6N2OS 

人主要组织相容性复合体Ⅱ类elisa试剂盒   人主要组织相容性复合体Ⅱ类试剂盒   规格型号:96T/48T   人主要组织相容性复合体Ⅱ类试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:人主要组织相容性复合体Ⅱ类试剂盒、人主要组织相容性复合体Ⅱ类 elisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。  2-Methyl-4-nitrobenzoic acid  1975-51-5  中文名:  分子式:C8H7NO4  度:98.0%  关键词: 

人主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHC/HLA-)ELISA试剂盒     2-Methylanthraquinone  中文名:2-甲基蒽醌  分子式:C15H10O2  度:98.0%

人主要组织相容性复合体Ⅰ类elisa试剂盒   人主要组织相容性复合体Ⅰ类试剂盒   规格型号:96T/48T   人主要组织相容性复合体Ⅰ类试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:人主要组织相容性复合体Ⅰ类试剂盒、人主要组织相容性复合体Ⅰ类 elisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。  2-Methyl-4-nitrobenzoic acid  1975-51-5  中文名:  分子式:C8H7NO4

运输和保存:
视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。

 

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