大鼠食管平滑肌细胞提取物说明书

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大鼠食管平滑肌细胞提取物【Rat Esophageal: Normal Esophageal Smooth Muscle Cell Derivatives】

大鼠食管平滑肌细胞提取物是从大鼠食管平滑肌细胞提取的，大鼠食管平滑肌细胞从正常大鼠食管组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项：

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

狂犬病病毒巢式RT-PCR检测试剂盒/Paroxetine hydrochloride782469盐酸帕罗西汀

狂犬病病毒实时荧光RT-PCR试剂盒Paris Saponin VII681244重楼皂苷VII

犬瘟热病毒RT-PCR检测试剂盒/Parecoxib 19845帕瑞考昔钠

犬瘟热病毒通用型实时荧光RT-PCR检测试剂盒p-Anisoin1192对茴香偶姻
Human plasminogen / plasmin (PL/Fbn) ELISA Kit 人纤溶酶/纤维蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA试剂盒  1-Methyl-L-4,5-dihydroorotic acid  中文名：1-甲基-L-4,5-二氢乳清酸  分子式：C6H8N2O4 

Human plasminogen (Plg) ELISA Kit 人纤溶酶原(Plg)ELISA试剂盒  1-chloro-6-(5-ethynylthiophen-2-yl)hexa-3,5-diyn-2-ol  中文名：  分子式：C12H7ClOS 

Human plasmin aiplasmin complex (PAP) ELISA Kit 人纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)ELISA试剂盒  1-Cyclopropyl-6,7-difluoro-1,4-dihydro-8-methoxy-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid  112811-72-0  中文名：  分子式：C14H11F2NO4 

Human nonmethylated oligonucleotide (NON) ELISA Kit 人非甲基化寡核苷酸(NON)ELISA试剂盒  2-Allylphenol  1745-81-9  中文名：2-烯丙基酚  分子式：C9H10O 

Human non neuronal enolase (NNE) ELISA Kit 人非神经元性烯醇化酶(NNE)ELISA试剂盒  2-Acetyl-6-methoxynaphthalene  3900-45-6  中文名：6-甲氧基-2-乙酰萘  分子式：C13H12O2
通关藤苷H（标准品）  Tenacissoside H  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗体(sNP/Sm)ELISA试剂盒 ，英文名： sNP/Sm ELISA Kit

葫芦素E（标准品）  Cucurbitacin E  质量规格：HPLC≥95%，标准品 小鼠抗心0脂抗体IgA(ACA-IgA)ELISA检测试剂盒Mouseai-cardiolipinaibodyIgA,ACA-IgAELISAKit 96T/48T

钩吻素子（标准品）  Koumine  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠抗心0脂抗体IgA(ACA-IgA)ELISA试剂盒 ，英文名： ACA-IgA ELISA Kit

钩吻素甲（标准品）  Gelsemine  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠抗心0脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISA检测试剂盒Mouseai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISAKit 96T/48T

原B1（标准品）  Procyanidin B1  质量规格：HPLC≥95%，标准品 小鼠抗心0脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISA试剂盒 ，英文名： ACA-IgG ELISA Kit

杯苋甾酮（标准品）  Cyasterone  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA检测试剂盒Mouseai-cardiolipinaibodyIgM,ACA-IgMELISAKit 96T/48T

四氢小檗碱（标准品）  Tetrahydroberberine,THB  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒 ，英文名： ACA-IgM ELISA Kit

通关藤苷I（标准品）  Tenacissoside I  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠抗心肌抗体(AMA)ELISA试剂盒 ，英文名： AMA ELISA Kit

通关藤苷G（标准品）  Tenacissoside G  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA检测试剂盒MouseplateletaibodiesIgG/M/A,PA-IgG/M/AELISAKit 96T/48T

白花前胡丙素（标准品）  Praeruptorin C  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA试剂盒 ，英文名： PA-IgG/M/A ELISA Kit
大鼠食管平滑肌细胞提取物说明书人周期素依赖性激酶5elisa试剂盒   人周期素依赖性激酶5试剂盒   规格型号：96T/48T   人周期素依赖性激酶5试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人周期素依赖性激酶5试剂盒、人周期素依赖性激酶5 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  2-Hydroxytetracosanoic acid ethyl ester  124111-47-3  中文名：  分子式：C26H52O3  度：98.0%  关键词：  植物提取物; 天然产物; 天然产物库

人周期素依赖性激酶5(CDK5)酶联吸附测定试剂盒   Human CDK5 (Cyclin Depende Kinase 5) ELISA Kit                 2-Flurbiprofen  中文名：氟比洛芬  分子式：C15H13FO2 

人周期素依赖性激酶5(CDK-5)ELISA试剂盒     2-Hydroxyquinoxaline  1196-57-2  中文名：  分子式：C8H6N2O  度：98.0%  关键词： 

人周期素依赖性激酶4elisa试剂盒   人周期素依赖性激酶4试剂盒   规格型号：96T/48T   人周期素依赖性激酶4试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人周期素依赖性激酶4试剂盒、人周期素依赖性激酶4 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  2-Hydroxytetracosanoic acid ethyl ester  124111-47-3  中文名：  分子式：C26H52O3 

人周期素依赖性激酶4(CDK4)酶联吸附测定试剂盒   Human CDK4 (Cyclin Depende Kinase 4) ELISA Kit  2-Flurbiprofen  中文名：氟比洛芬  分子式：C15H13FO2  度：98.0%

注意事项：

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。