人前脂肪细胞提取物培养

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人前脂肪细胞提取物【Human Adipose: Preadipocyte Derivatives】

人前脂肪细胞提取物是从人前脂肪细胞提取的，人前脂肪细胞从正常人脂肪组织制备。正常人脂肪组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项：

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

犬细小CPV快速检测卡Boldenone propionate9772宝丹酮酯

犬冠状CCV快速检测卡Dromostanolone propionate5212屈他雄酮酯

犬轮状CRV快速检测卡Trenbolone acetate1614

副流感CPIV快速检测卡Trenbolone1613群勃龙

腺病毒CAV2快速检测卡Mestanolone5211美雄诺龙
Methyl 3-amino-2-[[(2'-cyanobiphenyl-4-yl)methyl]amino]benzoate  中文名：  分子式：C22H19N3O2    猪白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒           

Methyl 2-ethoxybenzimidazole-7-carboxylate  中文名：  分子式：C11H12N2O3    猪白介素8(IL-8/CXCL8)ELISAKit  

Methyl 2-bromomethyl-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：Methyl 2-bromomethyl-3-nitrobenzoate    猪白介素6(IL-6)ELISAKit  

Methyl 2,2-dithienylglycolate  中文名：  分子式：C11H10O3S2    猪白介素4(IL-4)ELISAKit  

Methyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C22H17N3O4    猪白介素3(IL-3)ELISAKit
盐酸米诺环素(标准品)  Minocycline hydrochloride  质量规格：>98%,BR 大量蛋白样品树脂法去内试剂盒5

盐酸米托蒽醌(进分)  Mitoxantrone HCl  质量规格：进分sigma M6545 大量蛋白样品树脂法去内试剂盒5

盐酸米托蒽醌  Mitoxantrone HCl  质量规格：>98%,USP,可用于细胞培养 大量蛋白样品液相法去内试剂盒5

盐酸米托蒽醌（标准品）  Mitoxantrone HCl  质量规格：HPLC>98%,标准品 大量蛋白样品液相法去内试剂盒5

咪唑立宾  Mizoribine  质量规格：>98%,细胞培养级 大量蓝藻菌基因组DNA氯化铯萃取试剂盒5

莫吉司坦  Moguisteine  质量规格：>98%,BR 大量全血基因组DNA化试剂盒(20毫升全血)10

莫吉司坦(标准品)  Moguisteine  质量规格：HPLC>98%,标准品 大量全血基因组DNA化试剂盒10

糠酸莫米松  Mometasone furoate  质量规格：>98%,USP31 大量微藻菌基因组DNA萃取试剂盒(高多糖/酚)5

糠酸莫米松(标准品)  Mometasone furoate  质量规格：HPLC>98%,标准品 大量腺病毒沉淀法化试剂盒1

纳他霉素,匹马霉素,那他霉素,游霉素  Natamycin,Pimaricin  质量规格：>90%,BR 大量腺病毒氯化铯化试剂盒5
人前脂肪细胞提取物培养β-Anhydrouzarigenin  3080-20-4  中文名：  分子式：C23H32O3  度：97.0%  关键词：  夹竹桃; 强心苷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶elisa试剂盒   小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶试剂盒、小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

α-Tocopherolquinone  7559/4/8  中文名：  分子式：C29H50O3  度：98.0%  关键词：  降压; 血小板聚集抑制剂; 植物毒性; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠致癌基因相关蛋白elisa试剂盒   小鼠致癌基因相关蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠致癌基因相关蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠致癌基因相关蛋白试剂盒、小鼠致癌基因相关蛋白elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

α-Spinasterone  23455-44-9  中文名：  分子式：C29H46O  度：%  关键词：  抗真菌; 豆甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠脂联素elisa试剂盒   小鼠脂联素试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠脂联素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠脂联素试剂盒、小鼠脂联素elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

α-Spinasterol glucoside  1745-36-4  中文名：α-菠甾醇葡萄糖苷  分子式：C35H58O6  度：97.0%  关键词：  抗真菌; 豆甾烷; 甾苷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠脂蛋白elisa试剂盒   小鼠脂蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠脂蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠脂蛋白试剂盒、小鼠脂蛋白elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  

α-Spinasterol acetate  4651-46-1  中文名：α-菠甾醇乙酸酯  分子式：C31H50O2  度：96.0%  关键词：  豆甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠脂联素(mouse Adiponectin)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

注意事项：

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。