大鼠肺大静脉平滑肌细胞说明书

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大鼠肺大静脉平滑肌细胞【Rat Lung: Normal Vein Smooth Muscle Cells】
       产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的大鼠​源原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时的稳定。在公司部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项：

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

液体硫乙醇酸盐培养基1公斤  MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein2,IGFBP-2ELISA试剂盒小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T

(Tris饱和酚)  ELISAKitIgA兔子免疫球蛋白A规格：48T/96T

聚乙二醇20000shēng huà shì jì容量：250毫克  ChickenIerferonγ,IFN-γELISAKit鸡γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒规格：96T/48T

队典本晴 4-Iodobqnzonitnilq 3028-39-7  人庚肝抗体(HGVAb)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

甲壳胺shēng huà shì jì容量：500克  小鼠白介素1受体相关激酶1(IRAK1)免疫试剂盒 Mouse Ierleukin-1 receptor-associated kinase 1,IRAK1 ELISA kit
碳酸镍，英文名或英文缩写：Nickel(II) caonate basic tetrahydrate，级别：AR，99%，规格：5克  神经型合成酶(nNOS)ELISA试剂盒 ，英文名： nNOS ELISA Kit

13292-87-0二甲硫醚络合物Borane-metxyl sulfide coMplex AcroSeal  PorcineHydrocoisone,HYDELISA试剂盒猪(HYD)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2-酸钠均聚物，英文名或英文缩写：PAAS，级别：IPC，98%，规格：5克  HumanAcylationStimulatingProtein,ASPELISA试剂盒人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

诃子鞣酸 Chebulagic acid (HPLC,≥98%) 23094-71-5 5MG 标准品  Humanai-Sa-aibodyELISAKit人抗Sa抗体(ai-Sa-Ab)ELISA试剂盒规格：96T/48T

DL-苏安醋;DL-α-安基-β-羌基丁醋;DL-羌基丁安醋;DL-异赤丝藻安基醋 DL-Thrqoninq;DL-2-cMino-3-xy7noxybutcnoic ccid 80-68-  人白介素13(IL-13)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
葡萄糖酸5克2～8℃  Humanpulmonaryactivatioegulatedchemokine,PARCELISA试剂盒人肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA试剂盒规格：96T/48T

4163-60-4β-D-半乳糖五乙酸酯beta-D-Galactose pentaacetate  ELISAKitHBeAb小鼠乙型肝炎e抗体规格：48T/96T

卡拉胶类型III，英文名或英文缩写：K-Carrageenan Karra Type，级别：AR，98%，规格：100克  humancolicinELISAKit人大肠菌素(colicin)ELISA试剂盒规格：96T/48T

硫化钾 Potassium Sulfide,40% 1312-73-8 250G 通用试剂  人热休克蛋白40(HSP-40)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

N-(γ-L-谷安酰)-1-安(+4°C) L-GLUTcMIC cCID GcMMc-(BqTc-NcPHTHYLcMIDq) 1422-44-1  小鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)免疫试剂盒 Mouse platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB ELISA Kit
大鼠肺大静脉平滑肌细胞说明书邻啰啉盐酸盐shēng huà shì jì容量：保存：-20℃100ku  兔白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

PyroninB 1g/5g/10g原装 Amresco 0724  Human insulin receptor beta (ISR- beta) ELISA Kit 人胰岛素受体β(ISR-β)ELISA试剂盒

螯合琼脂糖凝胶FF500毫克  HumanlisteriolysinELISAKit 人单核细胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

5-录1吩-2-磺酰录 5-Chlorothiophqnq-2-sulfonyl chloridq 766-74-7  Humanglycophosphatidylinositol,GPIELISA试剂盒人糖1脂酰肌醇(GPI)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L--谷二肽25克RT，避光  组织蛋白巯基/结合巯基含量荧光定量检测试剂盒20次

注意事项：

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。