PrimaCell™小鼠直肠平滑肌细胞试剂盒

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PrimaCell™小鼠直肠平滑肌细胞试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

细胞培养方法；

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项；

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

英文名称HumaumornecrosisfactorsolublereceptorⅡELISAKIT人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsRⅡ)规格：96T/48T  104012-37-5款冬酮品牌  Tussilagone

超氧化物歧化酶(SOD)活性酶动力比色法定量检测试剂盒(含标准样)50  404-86-4辣椒碱规格  Capsaicin

RatgranzymesA,Gzms-AELISA试剂盒大鼠颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒规格：96T/48T  58543-16-1莱苞迪苷A  Rebaudioside A

小鼠周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)ELISA试剂盒 ，英文名： CDKN2A ELISA Kit  79498-31-0蓝萼甲素说明书  glaucocalyxin A

犬双氢(DHT)ELISA检测试剂盒CanineDihydrotestosterone,DHTELISAKit 96T/48T  11088-09-8CAS号：11088-09-8品牌  wilforine
53956-04-0甘草酸单铵盐  Glycyrrhizic acid ammonium salt   猪透明质酸(HA)ELISA检测试剂盒PorcineHyaluronicacid,HAELISAKit 96T/48T

53947-92-5补骨脂宁品牌  corylin    猪铁蛋白(FE)试剂盒 Pig ferritin,FE ELISA Kit

539-15-1大麦芽碱说明书  Hordenine   猪糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)试剂盒 Pig Glycated hemoglobin A1c,GHbA1c ELISA Kit

537-73-5异阿魏酸说明书  3-Hydroxy-4-methoxycinnamic acid  猪胎球蛋白A 试剂盒 Pig Fetuin A ELISA Kit

535-83-1葫芦巴碱  Trigonelline   猪胎盘生长因子(PGF)试剂盒 Pig Placea growth factor,PGF ELISA kit
犬窖蛋白Caveolin-1(CAV1)试剂盒 Dog Caveolin-1,CAV1 ELISA kit  88664-08-811-羟基柳杉酚规格  11-hydroxy-sugiol

英文名称Humanhemeoxygenase-2ELISAKit人血红素氧合酶2(HO-2)规格：96T/48T  1352001-09-23β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-醇  3β-acetoxy-eupha- 7,25-dien-24(R)-ol

化线粒体呼吸控制率(RCR)定量检测试剂盒20  26791-73-1苍耳亭说明书  Xanthatin

RatInsulin-likegrowthfactorbindingprotein2,IGFBP-2ELISA试剂盒大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T  140670-84-4Levatin品牌  Levatin

小鼠载脂蛋白C4(APOC4)ELISA试剂盒 ，英文名： APOC4 ELISA Kit  76475-17-7Croverin规格  Croverin
PrimaCell™小鼠直肠平滑肌细胞试剂盒331-39-5咖啡酸品牌  Caffeic acid  杂交清洗液500毫升

33069-62-4紫杉醇规格  Taxol  远西方杂交(FARWESTERNBLOT)印迹消除试剂盒20

32981-86-510-脱乙酰基巴卡丁III  Deacetylbaccatin III   原生质酵母细胞转化试剂盒20

327-97-9绿原酸说明书  Chlorogenic acid  元素检测样品处理试剂盒20

32791-84-7人参三醇品牌  Panaxatriol  玉米样品处理试剂盒20

注意事项；

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。