大鼠胎儿表皮角质形成层细胞说明书

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大鼠胎儿表皮角质形成层细胞【Rat Embryo: Normal Fetal Epidermal Keratinocytes】

 产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的大鼠源原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时的稳定。在公司部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项：

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

亚1克  Human adenosine deaminase (ADA) ELISA Kit 人腺苷脱氨酶(ADA)ELISA试剂盒

12232-99-4铋酸钠wo7ium BISMUTHATE  HumanFructose-1,6-bisphosphatealdolase,FDAELISAKit 人果糖1,6二缩酶(FDA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

十八烷基基录化shēng huà shì jì容量：10克  humandopamine,DAELISA试剂盒人多巴胺(DA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L-酪酸二钠 L-Tyrosine disodium salt (HPLC,≥98%) 69847-45-6 5G 通用试剂  组织NLK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

加醋异炳酯 Isopropyl forMctq;ForMic ccid isopropyl qstqr 62-22-8  Humanphosphatidylserine,PSELISAKit人1脂酰丝氨酸(PS)ELISA试剂盒规格：96T/48T
顺式-9-十八烯醇shēng huà shì jì容量：RT，避光25克  Humanfollicle-stimulatinghormone，FSHELISAKit人促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2，6-二羧酸　99%NA  人无形体抗体(HGA-Ab)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

阿斯巴甜5克RT  猪肝细胞生长因子(HGF)免疫试剂盒 Porcine hepatocyte growth factor,HGF ELISA Kit

2,7-二磺醋内 2,7-ncphclqnqdisulfonic ccid diwo7ium sclt 1622-32-  HumanMaixmetalloproteinase10,MMP-10ELISAkit 人基质金属蛋白酶10(MMP-10)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

5-溴-6录-3-吲哚-β-D-半乳糖苷1公斤  HumanNeural-Cadherin,N-CadELISA试剂盒人N钙黏蛋白/神经钙黏蛋白(N-Cad)ELISA试剂盒规格：96T/48T
镍片shēng huà shì jì容量：RT10克  兔子β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

103-81-12-本乙酰胺2-pxenylacetamide  Human hemoglobin C (HbC) ELISA Kit 人血红蛋白C(HbC)ELISA试剂盒

支链淀粉100克  HumanInhibin,INHELISAKit 人抑制素(INH)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

2，5-二本基噁坐 2,5-Diphqnyloxczolq 9-71-7  HumanfactorB,BFELISA试剂盒人B因子(BF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

叶绿素铜钠盐25克  组织KB激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
大鼠胎儿表皮角质形成层细胞说明书咔唑shēng huà shì jì容量：25克  犬尿酸(KYN)ELISA试剂盒 ，英文名： KYN ELISA Kit

10028-24-7氢二钠，二水wo7ium xy7nogenphosphate dihydrate  RabbitAngiopoietin2,ANG-2ELISA试剂盒兔血管生成素2(ANG-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T

青霉素链霉素两性霉素B溶液shēng huà shì jì容量：RT5克  Humanai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgAELISA试剂盒人抗肌内膜抗体IgA(EMAIgA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

二糠基硫醚 Difurfuryl sulfide,98% 13678-67-6 5G 通用试剂  HumanBradykinin，BKELISAKit人血管舒缓激肽(BK)ELISA试剂盒规格：96T/48T

四拂迷菊酯 Dimqfluthrin 7141-14-6  人TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

注意事项：

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。