犬肌钙蛋白Ielisa检测试剂盒说明书Canine CTnI elisa kit 产品名称 | 犬肌钙蛋白Ielisa检测试剂盒说明书 | 英文名称 | Canine CTnI elisa kit | 规格 | 48T/96T |
犬肌钙蛋白Ielisa检测试剂盒说明书Canine CTnI elisa kit【实验用途】CTnI肌钙蛋白I,TnI是肌肉舒缩的分子开关,当胞浆内钙离子浓度较低时,TnI的抑制区域(C末端12个氨基酸;cTnI137-148)与肌动-原肌球蛋白紧密结合,横桥三磷酸腺苷酶(ATPase)失活,细肌丝被关闭,肌肉处于舒张状态。当钙离子浓度升高到一定程度时, TnC与钙离子结合,导致其构型发生改变,并将此效应传递到肌钙蛋白,TnI的构型随之发生改变,与肌动-原肌球蛋白脱离,抑制作用被解除,横桥ATPase被激活,细肌丝发生滑动,肌肉表现出收缩性。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂(ELISA)。预先包被的犬cTnI抗体为多克隆犬cTnI抗体。检测相犬cTnI抗体也为多克隆犬cTnI抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记犬cTnI抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。。 试剂配制: 1、犬肌钙蛋白Ielisa检测试剂盒说明书酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。 2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。 3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。 4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。 5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。 6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100) 7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100) 8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 样本处理及要求: 1.犬肌钙蛋白Ielisa检测试剂盒说明书血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。 仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。 3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
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