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小鼠小扁豆素结合型甲胎蛋白双抗体夹心法
点击次数:76 发布时间:2020-07-15

小鼠小扁豆素结合型甲胎蛋白双抗体夹心法(检测未知抗原) 间接法(检测未知抗体)

1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。

2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

3、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。

4、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。

5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml

6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

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