PrimaCell™人脐带血单核细胞试剂盒培养

PrimaCell™人脐带血单核细胞试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

肠杆菌EE营养肉汤500毫升  79484-75-6刺五加苷D规格  Eleutheroside D

Ratgalanin,GALELISA试剂盒大鼠甘肽/甘素(GAL)ELISA试剂盒规格：96T/48T  39432-56-9刺五加苷E  Eleutheroside E

小鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒 ，英文名： HIS ELISA Kit  104777-68-6大车前苷说明书  Plantamajoside

小鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA检测试剂盒MousecoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-AgELISAKit 96T/48T  552-66-9大豆苷品牌  Daidzin

人抗白蛋白抗体(AAA)试剂盒 Human ai-albumin aibody,AAA ELISA Kit  486-66-8大豆苷元规格  Daidzein
76135-82-5牡荆素鼠李糖苷说明书  Rhamnosylvitexin  组织1脂酶C(PhospholipaseC)活性比色法定量检测试剂盒20

76135-82-5牡荆素葡萄糖苷规格  Glucosyl-vitexin    组织1脂酶B(PhospholipaseB)活性比色法定量检测试剂盒20

760961-03-3常春藤苷D品牌  Hederacoside D   组织1脂酶A2(PhospholipaseA2)活性荧光定量检测试剂盒20

75799-18-7PresapogeninCP4  Presapogenin CP4   组织1脂酶A2(PhospholipaseA2)活性比色法定量检测试剂盒20

7518-22-1楤木皂苷A说明书  Cantleyoside  组织1酸腺苷脱氨酶(AMPD)活性比色法定量检测试剂盒20
Ratierferon-inducibleprotein10,IP-10ELISA试剂盒大鼠干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA试剂盒规格：96T/48T  73069-14-4白术内酯Ⅱ品牌  2-Atractylenolide

小鼠诱导型合成酶(iNOS)ELISA试剂盒 ，英文名： iNOS ELISA Kit  55481-88-4大叶茜草素规格  Mollugin

小鼠补体蛋白3(C3)ELISA检测试剂盒MouseCompleme3,C3ELISAKit 96T/48T  916347-31-4断血流皂苷A  Clinodiside A

人解整合素样金属蛋白酶15(ADAM15)试剂盒 Human A Disiegrin And Metalloprotease 15,ADAM15 ELISA Kit  槐角碱说明书 

Ratai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISAKit大鼠抗心1脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISA试剂盒规格：96T/48T  乌金苷品牌
PrimaCell™人脐带血单核细胞试剂盒培养17910-09-7莪术烯规格  Curzerene   英文名称Ratlipoprotein-associatedphospholipaseA2ELISAKit大鼠脂蛋脂酶A2(Lp-PLA2)ELISAKit规格：96T/48T

177931-17-8三白草酮  Sauchinone  英文名称RatLHELISAKit大鼠促黄体激素(LH)规格：96T/48T

17680-84-1高车前苷  Homoplantaginin   英文名称RatLHELISAKit大鼠促黄体激素(LH)规格：96T/48T

17650-84-9山柰酚-3-O-芸香糖苷品牌  Kaempferol-3-rutinoside   英文名称Ratleucocyteaigen-B27ELISAKit大鼠白细胞抗原B27(HLA-B27)规格：96T/48T

174972-80-6巴利森苷C  Parishin C    英文名称Ratleucocyteaigen-B27ELISAKit大鼠白细胞抗原B27(HLA-B27)规格：96T/48T

运输和保存；
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。