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上海一研生物科技有限公司
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小鼠肾组织提取物培养

小鼠肾组织提取物培养
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小鼠肾组织提取物培养在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
  小鼠肾组织提取物培养的详细资料:

小鼠肾组织提取物【Kidney: Normal Mouse Kidney Derivatives

肾位于脊柱两侧,紧贴腹后壁,居腹膜后方。肾属于泌尿系统的一部分,负责过滤血液中的杂质、维持体液和电解质的平衡,后产生尿液经由后续管道排出体外,同时也具备内分泌功能以调节血压。公司科技提供来自新鲜或冷冻小鼠肾组织中高质量的总RNAPCR准备的第一条cDNA链,蛋白质及其亚组分。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究

总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。 

 

 

实验要点及说明;

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

运输和保存;

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。

操作要点;

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

Eppendorf 移液器1-Benzyl-ethoxyhydantoin6585521-苄基-乙氧基海因

Millipore Ultra.5超滤管个/ 2-Benzylaminopyridine693572-苯甲基氨基吡啶

Millipore Ultra5超滤管5/ 5-BenzylH-tetrazole1848955-苄基H-四唑

Millipore Ultra超滤管5/ 4,4'-Biphenol9284,4'-

NCBenzyl 4-hydroxybenzoate9484-羟基苯甲酸苄酯
Daturataturin A  133360-51-7  中文名:  分子式:C34H48O10    Humanparathyroidhormone-likeprotein,PLPELISAKit人甲状旁腺激素样蛋白(PLP)ELISA试剂盒规格:96T/48T

8-Hydroxyodoroside A  176519-75-8  中文名:  分子式:C30H46O8    甲状腺素(T4)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

21-Deoxyneridienone B  924910-83-8  中文名:  分子式:C21H28O3    Human thymus expressed chemokine (TECK/CCL25) ELISA Kit 人胸腺表达趋化因子(TECK/CCL25)ELISA试剂盒

Dehydroadynerigenin glucosyldigitaloside  144223-70-1  中文名:  分子式:C36H52O13    Humanai-albuminaibody,AAAELISAKit 人抗白蛋白抗体(AAA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Tenacigenoside A  920502-42-7  中文名:  分子式:C35H56O12    Humanendotoxin,ETELISA试剂盒人内(ET)ELISA试剂盒规格:96T/48T
蟛蜞菊内酯 HPLC98% 20mg ELISAKitVD人维生素D规格:48T/96T

霹雳萝芙木碱 HPLC98% 10mg ELISAKitVE-cad人血管内皮钙粘着蛋白复合体规格:48T/96T

平贝碱甲 HPLC98% 20mg ELISAKitVEGF-B人血管内皮细胞生长因子B规格:48T/96T

苹果酸 HPLC98% 20mg ELISAKitVEGF-C人血管内皮细胞生长因子C规格:48T/96T

蒲公英赛醇 HPLC98% 20mg ELISAKitVEGF-D人血管内皮细胞生长因子D规格:48T/96T

蒲公英甾醇 HPLC98% 20mg ELISAKitVEGFR-1人血管内皮细胞生长因子受体1规格:48T/96T

蒲公英甾醇乙酸酯 HPLC98% 10mg ELISAKitVEGFR-2人血管内皮细胞生长因子受体2规格:48T/96T

普拉洛芬 HPLC98% 20mg ELISAKitVEGFR-3人血管内皮细胞生长因子受体3规格:48T/96T

七叶胆苷XVII HPLC98% 20mg ELISAKitVEGF人血管内皮细胞生长因子规格:48T/96T

七叶树皂苷B HPLC98% 20mg ELISAKitVE人维生素E规格:48T/96T
小鼠肾组织提取物培养神经胶质纤维酸性蛋白elisa试剂盒   神经胶质纤维酸性蛋白试剂盒   规格型号:96T/48T   神经胶质纤维酸性蛋白试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:神经胶质纤维酸性蛋白试剂盒、神经胶质纤维酸性蛋白elisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。  9-Anthracenylmethyl acrylate  31645-34-8  中文名:丙烯酸-9-蒽甲酯  分子式:C18H14O2  度:98.0%  关键词: 

神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒     9-Anthracenecarboxylic acid  723-62-6  中文名:9-蒽甲酸  分子式:C15H10O2  度:98.0%  关键词: 

神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  15,16-Dihydroxyoctadeca-9Z,12Z-dienoic acid  中文名:  分子式:C18H32O4  度:%

上腺髓质素elisa试剂盒   上腺髓质素试剂盒   规格型号:96T/48T   上腺髓质素试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:上腺髓质素试剂盒、上腺髓质素elisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。  Benzoyl-L-histidine  中文名:苯甲酰基-L-组氨酸  分子式:C13H13N3O3  度:98.0%

上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒     9-Aminominocycline hydrochloride  149934-21-4  中文名:  分子式:C23H29ClN4O7  度:98.0%  关键词:

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