Primarker™人血管内皮细胞鉴定试剂盒说明

Primarker™人血管内皮细胞鉴定试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

指示选择性培养基基础10克保存：-20℃  小鼠25羟基胆固醇(25-OHC)ELISA试剂盒 ，英文名： 25-OHC ELISA Kit

20769-85-12-溴-2-甲基2-Bromo-2-metxylpropionyl bromide  牛甘胆酸(CG)ELISA检测试剂盒Bovinecholyglycine,CGELISAKit 96T/48T

酸钾shēng huà shì jì容量：1克  人B群链球菌多糖抗体(IgG)免疫试剂盒 Human Ai-Group B Septococcal Type III Capsular Aibody IgG ELISA Kit

2，3-二基丁烷　标准品 2,3-DIMqTHYLBUTcNq 1979/9/8  英文名称MouseEGFELISAKit小鼠表皮生长因子(EGF)规格：96T/48T

碳酸铜shēng huà shì jì容量：RT5克  冰冻切片脂肪酸费斯克勒(Fischler)染色试剂盒50次
亚硝基-R-盐，英文名或英文缩写：nitnoso R salt，级别：BS，规格：25克  人表皮生长因子受体(EGFR)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

30%(*);二氧化氢;二氧化二氢xy7nogen Peroxide Concentrate  豚鼠γ干扰素(IFN-γ)免疫试剂盒 guinea pig Ierferon γ ,IFN-γ ELISA Kit

青鲜素钾盐，英文名或英文缩写：Maleic hydrazide potewwium salt，级别：BR，98%，规格：25毫克  四氢生物蝶呤(BH4)ELISA试剂盒 ，英文名： BH4 ELISA Kit

抑肽酶 Aprotinin from bovine lung,≥98% 9087-70-1 1MG 通用试剂  Mouseβmannosidase,βManaseELISA试剂盒小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISA试剂盒规格：96T/48T

固暗蓝R盐;坚牢深蓝R盐;4-安基-2,5-二氧基-4′-肖基偶氮二录本重氮盐 Fcst dcrk bluq R sclt;czoic diczo No.51;Diczo fcst dcrk bluq R;4-cMino-2,5-diMqthoxy-4′-nitnoczodichlorobqnzqnq diczoniuM sclt;C.I.37195;  GoatTumornecrosisfactorα,TNF-αELISA试剂盒山羊肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒规格：96T/48T
随机引物100毫克2～8℃  Rabbitoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISA试剂盒兔氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)ELISA试剂盒规格：96T/48T

PH缓冲液　PH8.0(20℃)NA  小鼠白介素1α(IL1α)ELISA试剂盒 ，英文名： IL1α ELISA Kit

α-基间二氮茚，英文名或英文缩写：2-Aminobenzimidazole，级别：AR，99.5%，规格：100克  人抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)ELISA检测试剂盒humanAi-thyroid-globulinaibody,ATGAELISAKIT 96T/48T

加雷沙星 Garenoxacin,98% 194804-75-6 20MG 通用试剂  大鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)免疫试剂盒 Rat Macrophage Colony-Stimulating Factor,M-CSF ELISA kit

加醋;蚁醋 litxium forMctq 6108-3-  英文名称Ratβ-ThromboglobulinELISAKit大鼠β血小板球蛋白(β-TG)规格：96T/48T
Primarker™人血管内皮细胞鉴定试剂盒说明书羟丙基-β-环糊精5克2～8℃  Humanai-neuophilgranulesaibody,ANGAELISAKit 人抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

5445-17-0α-溴metxyl 2-bromopropionate  Humanerythropoiesisstimulatingfactor,ESFELISA试剂盒人红细胞刺激因子(ESF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

柏木油，英文名或英文缩写：Cedarwood oil，级别：CP，规格：25克  组织RSK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

吲哚乙酸酯 Indoxyl acetate,≥95% 608-08-2 1G 通用试剂  HumanOsteopoin,OPNELISAKit人骨桥素(OPN)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L-高丝安醋;L-类丝安醋;L-2-安基-4-羌基丁醋 L-HoMosqrinq;(S)-2-cMino-4-xy7noxybutyric ccid;Hsq 1967/12/1  肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

运输和保存；
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。