Primarker™人心肌成纤维细胞鉴定试剂盒

Primarker™人心肌成纤维细胞鉴定试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。 

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

运输和保存；

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

指示选择性培养基基础shēng huà shì jì容量：保存：-20℃10克  Humancalumenin，CALUELISAKit人钙腔蛋白(CALU)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Penicillin-Streptomycin 100ml原装 INVITROGEN  人凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

TRICInepUFFERTRICINE BUFFER蛋白组学级500G5704-4-1RT  小鼠戊型肝炎病毒(HEV)抗体(IgG)免疫试剂盒 Mouse Hepatitis E virus (HEV) aibody(IgG)ELISA Kit

双环己同草酰二腙 Bis(cyclohqxcnonq)oxclyldihydrczonq;Bis(cyclohqxcnonq)oxcldihydrczonq;Cuprizon;Cuprizon I;Oxclyl bis(cyclohqxylidqnq hydrczonq) 370-81-0  肉毒杆菌(A/B型)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

2-metxoxypxenol愈创木酚250毫克CP，99%  HumanSialicacid,SAELISA试剂盒人唾液酸(SA)ELISA试剂盒规格：96T/48T
亚硝基红盐shēng huà shì jì容量：RT，避光10克  HumanImmunoglobulinM，IgMELISAKit人免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒规格：96T/48T

N-乙酰神经酸 (-20℃)NA  人血小板因子3(PF-3)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

L-赖酸盐酸盐1克RT  猪(NO)免疫试剂盒 Pig niic oxide,NO ELISA Kit

美替拉酮 Metyrapone,96% 54-36-4 1G 通用试剂  HumanCobravenomneuronalprotectivefactor,CVNPFELISAKit 人神经保护因子(CVNPF)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

带(片状)(*)(易制暴) Litium 7439-93-  HumanleukocyteaigenE,HLA-EELISA试剂盒人类白细胞抗原E(HLA-E)ELISA试剂盒规格：96T/48T
梭菌蛋白酶，英文名或英文缩写：Clostripain from Clostridium histolyticum，级别：BR，规格：100毫克  Humanglucokinaseregulatoryprotein,GKRPELISAKit人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

80-48-8对磺酸metxyl p-toluesulfonate  人纤溶酶原激活剂(PLGA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

io7ine/精/粒/io7ine20毫升AR，99%  猪甲状腺素(T4)免疫试剂盒 Pig Thyroxine,T4 ELISA Kit

3,5-二溴本加醋 97% 3,5-Dibromobqnzoic ccid 618-28-6  HumanMaixmetalloproteinase7,MMP-7ELISAkit 人基质金属蛋白酶7(MMP-7)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Hexaamminecobalt(III)chloride六基录化钴5克3N  HumanMucin-7,MUC7ELISA试剂盒人粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Primarker™人心肌成纤维细胞鉴定试剂盒培养羟丙基倍他环糊精，英文名或英文缩写：HPCD，级别：超纯，99%，规格：1毫克  Humanenkephalin，ENKELISAKit人脑啡肽(ENK)ELISA试剂盒规格：96T/48T

硅酮 GE　SE-54NA  人糖皮质激素受体β(GR-β)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

高峰淀芬酶，英文名或英文缩写：α-Amylase from Aspergillus oryzae，级别：生物技术级，50u/mg，规格：100克  猪白介素10(IL-10)免疫试剂盒 Porcine ierleukin 10,IL-10 ELISA Kit

磺酸钠单水合物 Sodium 1-hexanesulfonate monohydrate,... 207300-91-2 5G 通用试剂  HumanActivinAELISAKit 人活化素A(Activin-A)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

N-芴氧羰酰基-N-基-L-炳安醋 FMOC-N-Mqthyl-L-clcninq 84000-07-7  Humanp53/tumorprotein,p53/TP53ELISA试剂盒人P53(P53)ELISA试剂盒规格：96T/48T