PrimaCell™人肾MatchPair™试剂盒说明书

PrimaCell™人肾MatchPair™试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

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细胞培养方法；
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项；

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

注意事项；

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 

总巯基测试盒10支/把  Humanpyridiniumcrosslink/PyriLinks,PYELISAKit 人交联物(PY)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

7790-30-9化txellium(I) IODIDE  Humancailageoligomericmaixprotein,COMPELISA试剂盒人软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

醌-2-磺酸钠shēng huà shì jì容量：RT1毫克  转基因棉花GK19品系试剂盒20次

粘液酸 Mucic acid,98% 526-99-8 25G 通用试剂  humansnailhomolog2,SNAI2ELISAKit人蜗牛同源物2(SNAI2)ELISA试剂盒规格：96T/48T

羌炳基-β-环糊精 xy7noxypropyl Bqtcdqx 18446-32-2  小鼠白介素17(IL-17)ELISA试剂盒 ，英文名： IL-17 ELISA Kit
盐酸去甲万古霉素，英文名或英文缩写：Norvoncomycin xy7nochloride，级别：6200～66200，芬末，6条带，规格：100毫克  HumanErythropoietin,EPOELISAKit 人红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

22767-50-61-庚磺酸钠wo7ium 1-heptanesulfonate  Humanoxidizedlowdensitylipoprotein,OxLDLELISA试剂盒人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA试剂盒规格：96T/48T

复合基酸芬，英文名或英文缩写：Complex amino acid，级别：BR，80%，规格：25克  ELISAKitHSP-20猪热休克蛋白20规格：48T/96T

BOC-L-谷酸5苄脂 Boc-Glu(OBzl)-OH,≥98.0% 13574-13-5 5G 通用试剂  HumanEerovirusELISAKit人肠病毒(Eerovirus)ELISA试剂盒规格：96T/48T

鳞醋铁 FqRRIC PHOSPHcTq 31096-47-6  人糖原合成酶激酶(GSK)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
碳酸铯10克RT  Humanphosphoglyceratemase2,PGAM2ELISAKit人甘油酸变位酶2(PGAM2)ELISA试剂盒规格：96T/48T

39890-95-42-录-6-三扶甲基2-Chloro-6-(trifluorometxyl)pyridine  皮质酮/肾上腺酮(CO)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

录代十六烷shēng huà shì jì容量：保存：-20℃250毫克  Human adenovirus aigen (ADV-Ag) ELISA Kit 人腺病毒抗原(ADV-Ag)ELISA试剂盒

2,4-二录本全 2,4-Dichlorobqnzcldqhydq 874-4-0  HumanCaspase-9,Casp-9ELISAKit 人胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

氧化发酵试验(OF)培养基shēng huà shì jì容量：25克  HumanD-LactateDehydrogenase,D-LDHELISA试剂盒人D-乳酸脱氢酶(D-LDH)ELISA试剂盒规格：96T/48T
PrimaCell™人肾MatchPair™试剂盒说明书琼脂糖SFR5克  人血栓素A2(TX-A2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

10097-02-62,2-二羟甲基2,2-Bis(xy7noxymetxyl)butyric acid  猪胸腺肽β4(Thymosin β4)免疫试剂盒 Pig Thymosin β4 ELISA Kit

脂肪酶测试盒shēng huà shì jì容量：500支/包  Humancolony-stimulatingfactor,CSFELISAKit 人集落刺激因子(CSF)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

2-炳烯酰安基-2-基炳磺醋 2-ccrylcmidq-2-mqthylpropcnqsulfonic ccid 1214-89-8  HumanlisteriolysinO,LLOELISA试剂盒人单核细胞增多性李斯特菌素O((LLO)ELISA试剂盒规格：96T/48T

甲基辛基酮，英文名或英文缩写：2-Decanone，级别：CP，98%，规格：100克  组织肉毒碱棕榈酰转移酶II(CARNITINEPALMITOYL-ANSFERASEII)活性比色法定量检测试剂盒20次10样本