PrimaCell™人脐静脉平滑肌细胞试剂盒培养

PrimaCell™人脐静脉平滑肌细胞试剂盒

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

人抗补体1q抗体(ai-C1q-aibody)试剂盒 Human ai-C1q-aibody ELISA Kit  3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黄酮规格  3,5,6,7,8,3’,4’-heptemthoxyflavone

RabbitTissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISAKit兔组织因子途径抑制物(TFPI)ELISA试剂盒规格：96T/48T  873001-54-83,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇  3,29-Dibenzoyl Rarounitriol

载玻片细胞CREB蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  3，6-二芥子酰基蔗糖说明书  3,6’－Disinapoyl sucrose

Humanβai-galactanproteinsIgGELISA试剂盒人β乳糖蛋白抗体IgGELISA试剂盒规格：96T/48T  117047-07-13’-甲氧基葛根素品牌  3’-MethoxyPuerarin

小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒 ，英文名： HD ELISA Kit  3-羟基巴戟醌规格  3-Hydroxy-　morindone
R型三七皂苷R2  （R）Notoginsenoside R2   组织离子(Na)浓度荧光定量检测试剂盒20

989-51-5表没食子儿茶素没食子酸酯规格  EGCG   组织离子(Na)浓度化学比色法定量检测试剂盒20

98665-22-6灵芝酸G品牌  Ganoderic acid G    组织科萨基病毒B(CoxsackievirusB)定性检测试剂盒20

98474-78-3拟人参皂苷RT5说明书  Pseudoginsenoside RT5  组织巨噬细胞型抗酸酸性1酸酶(SACP)活性比色法定量检测试剂盒20

98296-48-1灵芝酸C2规格  Ganoderic acid C2    组织精氨酸(arginine)含量化学比色法定量检测试剂盒20
RabbitVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAKit兔血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒规格：96T/48T  28649-60-7环氧续随子醇品牌  Epoxylathyrol 

载玻片细胞IGF蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  6873-13-8黄柏碱规格  Phellodendrine

Humanβ-siteAPP-CleavingEnzyme1，1BACE1ELISA试剂盒人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA试剂盒规格：96T/48T  751-03-1黄柏酮  Obacunone

小鼠转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒 ，英文名： TGF-β1 ELISA Kit  40246-10-4黄豆黄苷说明书  Glycitin

小鼠糖原1酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA检测试剂盒MouseGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit 96T/48T  40957-83-3黄豆黄素品牌  Glycitein
PrimaCell™人脐静脉平滑肌细胞试剂盒培养122021-74-3丹参酚酸B甲酯品牌  Monomethyl lithospermate B   英文名称RatEpithelialneuophilactivatingpeptide-78ELISAKit大鼠上皮中性粒细胞活化肽(ENA-78)规格：96T/48T

122021-74-3丹参酚酸B甲酯  Monomethyl lithospermate B    英文名称RatEpithelialneuophilactivatingpeptide-78ELISAKit大鼠上皮中性粒细胞活化肽(ENA-78)规格：96T/48T

119425-90-0龙血素B规格  Loureirin B   英文名称RatEpinephrineELISAKit大鼠(Epinephrine)规格：96T/48T

118-34-3紫丁香苷  Syringin  英文名称RatendotoxinELISAKit大鼠内(endotoxin)ELISAKit规格：96T/48T

1182-34-91,3-二咖啡酰奎宁酸  Cynarin   英文名称RatendotoxinELISAKit大鼠内(endotoxin)ELISAKit规格：96T/48T

运输和保存；
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。