人胰腺癌组织提取物培养

人胰腺癌组织提取物【Human Cancer: Pancreatic Cancer Tissue Derivatives】

导管腺癌占胰腺癌的80％～90％，主要由分化不同程度的导管样结构的腺体构成，伴有丰富的纤维间质。有腺腔样分化的区域，可有少量粘液，肿瘤的间质含有丰富的和Ⅳ型胶原。公司科技提供来自新鲜或冷冻人胰腺癌组织中高质量的总RNA，PCR准备的第一条cDNA链，蛋白质及其亚组分。这些临床定义的人体组织标本采集自各地方医院，采集工作根据IRB和HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

PCR反应试剂盒(00bp)   次4,5-Dimethoxy-cyanobenzocyclobutane3524

pfu DNA聚合酶   0U/5×0U4,5,6,7-Tetrahydrothieno [3,2,c]pyridine hydrochloride287831

Real Taq DNA聚合酶   0U /5×0U 4,4'-Dimethoxytrityl chloride61564,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷

Taq plus DNA聚合酶   0U/5×0U4,4'-Diaminodiphenylsulfone84,4'-二氨基二苯砜

M-MLV(RNase H-) 反转录酶 00U 4,4'-Cyclohexylidenebisphenol84354,4'-环亚己基双苯酚
Docetaxel  中文名：多西他赛  分子式：C43H53NO14    猪生长激素(GH)ELISA试剂盒  

D-Mannitol diacetonide  中文名：  分子式：C12H22O6    猪上腺素(EPI)ELISA试剂盒           

DL-Alanyl-DL-Mine  中文名：DL-丙氨酰-DL-蛋氨酸  分子式：C8H16N2O3S    猪瘦素elisa试剂盒   猪瘦素试剂盒   规格型号：96T/48T   猪瘦素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：猪瘦素试剂盒、猪瘦素eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

DL-2-Amino-n-octanoic acid  中文名：DL-2-氨基正辛酸  分子式：C8H17NO2    猪食欲素受体elisa试剂盒   猪食欲素受体试剂盒   规格型号：96T/48T   猪食欲素受体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：猪食欲素受体试剂盒、猪食欲素受体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Diphenhydramine hydrochloride  中文名：盐酸苯海拉明  分子式：C17H22ClNO    猪食欲素elisa试剂盒   猪食欲素试剂盒   规格型号：96T/48T   猪食欲素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：猪食欲素试剂盒、猪食欲素eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
屈螺酮  Drospirenone  质量规格：>98%,USP grade 大鼠γ氨基(GABA)ELISA检测试剂盒RatGamma-aminobyricacid,GABAELISAKit 96T/48T

屈螺酮（标准品）  Drospirenone  质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA检测试剂盒RatIerferonγ,IFN-γELISAKit 96T/48T

炔雌醇(标准品)  Ethiny Estradiol  质量规格：>98%标准品 大鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA检测试剂盒Ratierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISAKit 96T/48T

炔雌醇  Ethiny Estradiol  质量规格：>98%,可用于细胞培养 大鼠阿立新A(OrexinA)ELISA检测试剂盒RatOrexinAELISAKit 96T/48T

乙硫异烟胺,硫异烟胺  amide  质量规格：>98.5% 大鼠癌标志物-CA153ELISA检测试剂盒RatmammarycarcinomaMarker-CA153ELISAKit 96T/48T

乙硫异烟胺,硫异烟胺（标准品）  amide  质量规格：HPLC>98%,标准品 大鼠癌标志物-CA153试剂盒 Rat mammary carcinoma Marker-CA153 ELISA Kit

依曲韦林  Etravirine  质量规格：>98% 大鼠艾杜糖硫酸酯酶(IDS)ELISA检测试剂盒Ratiduronatesulfatase,IDSELISAKit 96T/48T

法莫替丁  Famotidine  质量规格：>98% 大鼠白介素10(IL-10)ELISA检测试剂盒RatIerleukin10,IL-10ELISAKIT 96T/48T

法莫替丁(标准品)  Famotidine  质量规格：含量测定 大鼠白介素18(IL-18)Elisa检测试剂盒RatIerleukin18,IL-18ElisaKit 96T/48T

非布索坦  Febuxostat  质量规格：≥99% 大鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA检测试剂盒RatIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISAkit 96T/48T
人胰腺癌组织提取物培养γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒              6-Aminoquinoxaline  中文名：6-氨基喹喔啉  分子式：C8H7N3 

兔子β血小板球蛋白elisa试剂盒   兔子β血小板球蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子β血小板球蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子β血小板球蛋白试剂盒、兔子β血小板球蛋白酶elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  6-Aminoquinoxaline  6298-37-9  中文名：6-氨基喹喔啉  分子式：C8H7N3  度：98.0%   

兔子β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)ELISAKit     4-Amino-N-methylbenzamide  中文名：4-氨基-N-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O  度：98.0%

兔子α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒     6-Aminopenicillanic acid  551-16-6  中文名：6-氨基青霉烷酸  分子式：C8H12N2O3S  度：98.0%   

兔子α2抗纤溶酶elisa试剂盒   兔子α2抗纤溶酶试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子α2抗纤溶酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子α2抗纤溶酶试剂盒、兔子α2抗纤溶酶elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  6-Aminonicotinic acid  3167-49-5  中文名：6-氨基烟酸  分子式：C6H6N2O2  度：98.0%

运输和保存；
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。