人成骨细胞提取物培养

人成骨细胞提取物【Human Bone: Normal Osteoblast Derivatives】

人成骨细胞提取物是从人原代成骨细胞提取的，人原代成骨细胞从正常人成骨组织制备。正常人成骨组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲株抗体ELISA检测试剂盒96/192/4Rifampicin132926利福平

猪圆环病毒2型抗体ELISA检测试剂盒           96Ribavirin367914利巴韦林

口蹄疫病毒NS抗体单抗阻断ELISA试剂盒96/192/4Rhein4783大黄酸

牛口蹄疫病毒非结构蛋白抗体胶体金检测试剂盒Retigabine18122瑞替加滨

牛结核γ-干扰素ELISA检测试剂盒/1Resibufogenin4659脂蟾毒配基
Perforatumone  827319-50-6  中文名：  分子式：C35H52O5  度：%  关键词：  植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠心素   英文名称：   aialnaiureticpeptide   规格：   48T/96T   英文缩写：   ANP

Pentoxyverine   23142-01-0  中文名：枸橼酸喷托维林  分子式：C26H39NO10  度：98.0%      小鼠凋亡诱导因子   英文名称：   apoptosis-inducing factor   规格：   48T/96T   英文缩写：   AIF

Pentagalloylglucose  14937-32-7  中文名：五没食子酰葡萄糖  分子式：C41H32O26  度：98.0%  关键词：    小鼠紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISAKit  

Pemetrexed di  357166-30-4  中文名：培美曲塞二钠  分子式：C21H23N5Na2O6  度：98.0%  关键词：    小鼠黑色素细胞抗体(MCAb)ELISAKit  

Pemetrexed  137281-23-3  中文名：培美曲塞二钠  分子式：C20H21N5O6  度：98.0%  关键词：    小鼠甲状腺素(T4)ELISAKit
长春西汀 HPLC≥98% 20mg AKT蛋白共沉淀分析试剂盒5

长春新碱 HPLC≥98% 20mg AMCA蛋白标记试剂盒3(200微克/)

长春质碱 HPLC≥98% 20mg AMPKELISA试剂盒鱼0酸化腺苷酸活化蛋白激酶规格：96T/48T

长梗秦艽酮 HPLC≥98% 20mg ANDROGEECEPTOR蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25

常春藤苷C HPLC≥98% 20mg ANDROGEECEPTOR蛋白共沉淀分析试剂盒5

常春藤苷D HPLC≥98% 20mg AnnexinV(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克

常春藤苷H HPLC≥98% 5mg ANNEXINV-FITC标记法细胞凋亡检测试剂盒10/20

常春藤皂苷B HPLC≥98% 20mg APATHY封片液10毫升

常春藤皂苷元 HPLC≥98% 20mg APC(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克

常春藤皂苷元OβD葡萄糖酯苷 HPLC≥98% 20mg APC蛋白标记试剂盒1(1毫克/)
人成骨细胞提取物培养Sprengerinin A  中文名：  分子式：C38H60O12    植物25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA试剂盒  

Spongouridine  中文名：阿糖尿苷  分子式：C9H12N2O6    鱼脱酶3（DIO3）ELISA检测试剂盒   96T/48T   ELISA   组装/原装

Soyacerebroside II  中文名：大豆脑苷II  分子式：C40H75NO9    鱼脱酶2（DIO2）ELISA检测试剂盒   96T/48T   ELISA   组装/原装        

Soyacerebroside I  中文名：  分子式：C40H75NO9    植物钙调素(CAM)ELISA试剂盒  

Sorafenib tosylate  中文名：索拉非尼  分子式：C28H24ClF3N4O6S    植物钙调0酸酶（CaN）ELISA试剂盒

运输和保存：
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。