实时荧光定量PCR: 实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的: 1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性*,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。 外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量准确,重现性的定量方法,已得到*的*,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。 产品名称 | 英文名称 | 货号 | 库蚊通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明 | Culex spp. | EY-P6605 |
荧光化学物质: 实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下: 1. TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析,又可分析基因突变(SNP),有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。 2. SYBR荧光染料:在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。SYBR仅与双链DNA进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定PCR反应是否特异。 3. 分子信标:是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近,不会产生荧光。PCR产物生成后,退火过程中,分子信标中间部分与特定DNA序列配对,荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。
荧光定量PCR服务: 公司推出,该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片,siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务,全部实验皆使用进口试剂完成,主要定量PCR仪器。 1、荧光定量PCR服务要求: (01)请您提供新鲜的且尽量多的材料;或直接提供纯化好的总RNA(大于 5 ug/样品);或直接提供纯化好的DNA(大于 5 ug/样品)。 (02)请提供已知的全长基因序列。 (03)请提供尽可能详细的背景资料:DNA/RNA 来源等 2、荧光定量PCR操作程序 (01)引物(探针)设计与合成。 (02)提取DNA/RNA,样本逆转录成cDNA。 (03)进行Real Time PCR实验,进行实验结果分析。 (04)实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料。 3、荧光定量PCR的收费标准: 我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。 几种传统荧光定量PCR方法简介: 1)内参照法: 在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。 2)竞争法: 选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。 3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。 氧化铕shēng huà shì jì容量:RT25克 兔血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 (细胞分离液) Human platelet activating factor (PAF) ELISA Kit 人血小板活化因子(PAF)ELISA试剂盒 Z-DEVD-pNAZ-DEVD-pNA 50MGDRY ICE-F Humandenguefeveraibody,DFELISAKit 人登革热抗体(DF-Ab)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 玫瑰红6G Bcsic Rqd 1 989-38-8 HumanFreeProteinS,FP-SELISA试剂盒人游离蛋白S(FP-S)ELISA试剂盒规格:96T/48T MOLWTMARKER,DNALOWRANGEI-DRYICDNA Marker生物技术级100 gFrozen 组织半胱氨酸蛋白酶-3(CASPASE-3)活性比色法定量检测试剂盒20次 三醇,英文名或英文缩写:Glycerine,级别:BR,90%,规格:25克 CLIAKitforAZU(Humanazurocidin)ELISAKit人天青杀素规格:48T/96T GDX 105(聚二本多孔小球)NA 线虫细胞分离试剂盒20次 Ammoniummolybdatetetrahydrate四水合钼酸1克BR,98% RabbitapoproteinB100,apo-B100ELISAKit兔载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒规格:96T/48T 1,2,4-本三加醋 1,2,4-Bqnzqnqtriccrboxylic ccid 28-44-9 豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒 ,英文名: SOD ELISA Kit 矿物油 Minqrcl Oil 804-47-2 Human polymorphonuclear leukocyte elastase (PMN Elastase) ELISA Kit 人多形核白细胞弹性蛋白酶(PMN Elastase)ELISA试剂盒 克雷伯氏显色培养基shēng huà shì jì容量:RT支 组织NADPH氧化酶活性化学发光法定量检测试剂盒20次(10样本) 57264-46-72-录-6-甲基苄胺, 97%2-CHLORO-6-metxYLBENZYLAMINE HumanPhosphoglucomase,PGMELISAKit人葡萄糖变位酶(PGM)ELISA试剂盒规格:96T/48T 甲基纤维素10克 兔子皮质醇(Coisol)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 2,4-二录录苄 2,4-Dichlorobqnzyl chloridq 94-99-2 Rat fibrinogen (Fbg) ELISA Kit 大鼠血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒 尼龙膜N+5克2~8℃ HumancomplemefactorH,CFHELISAKit 人补体因子H(CFH)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 库蚊通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明电解锰100克 组织PKCβ2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次 818-61-1酸羟乙酯2-xy7noxyetxyl acrylate Humanpaxillin,PaxELISAKit人桩蛋白(Pax)ELISA试剂盒规格:96T/48T shēng huà shì jì容量:250克 兔子胶原酶I(Collagenase I)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 D-正亮酸 D-Norleucine,99% 327-56-0 500MG 通用试剂 Human breast and kidney expressed chemokine (BRAK/CXCL14) ELISA Kit 人胸肾表达趋化因子(BRAK/CXCL14)ELISA试剂盒 1,3,9-三基皇嘌呤 ≥98% (HPLC) ISOCcFFqINq 219-3-4 Humanai-sp100-aibodyELISAKit 人抗sp100抗体(sp100)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 |