人肾系膜组织提取物培养

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人肾系膜组织提取物【Human Kidney : Normal Glomerular Mesangial Derivatives】

人肾系膜组织主要功能有：(1)组成过滤屏障内壁的重要部分。(2)在炎症和致血栓物质的刺激合成必要的生物活性分子。(3)受损后影响系膜细胞和上皮细胞，进而影响肾脏病变。公司科技提供来自新鲜或冷冻人肾系膜组织中高质量的总RNA，PCR准备的第一条cDNA链，蛋白质及其亚组分。这些临床定义的正常人体组织标本采集自各地方医院，采集工作根据IRB和HIPAA批准的方案进行。所有的产品在

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

细胞培养方法；

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项；

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

Tray Cleaner（水盘抑菌剂）Axitinib31945阿西替尼

Bath Cleaner0 mLAverantin532

Incubator Cleaner4 mLAvanafil37847阿伐那非

Room Cleaner4 mLAurantio-obtusin679795橙黄决明素

Tray Cleaner mLAtrazine19124阿特拉津
Ergosterol glucoside  中文名：麦角甾醇葡萄糖苷  分子式：C34H54O6  度：97.5%  兔血清总补体(CH50)ELISA试剂盒  

Phyperunolide E  中文名：  分子式：C28H40O9  度：98.0%  兔血清(NO)ELISA试剂盒  

Withanolide C  中文名：醉茄内酯C  分子式：C28H39ClO7  度：97.5%  兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA试剂盒           

Physapruin A  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  兔血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1   英文名称：   Rabbit Lctin like oxLDL Receptor 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   LOX-1

4β-Hydroxywithanolide E  中文名：4β-羟基醉茄内酯E  分子式：C28H38O8  度：98.0%  兔脂氧合酶同工酶   英文名称：   Rabbit Lipoxygenase Isozymes   规格：   48T/96T   英文缩写：   LOXI
瑞舒伐他汀/罗苏伐他汀游离酸  Rosuvastatin  质量规格：>97%,游离酸 大鼠绒毛膜促性腺激素β(β-CG)试剂盒 Rat Chorionic Gonadoophin β,β-CG ELISA Kit

苏丹I/溶剂黄14  Sudan I/Solvent Yellow 14  质量规格：BS生物染色级 大鼠溶质载体家族2(易化葡萄糖转运蛋白),成员2(SLC2A2)试剂盒 Rat Sole carrier family 2,facilitated glucose anspoer member 2,SLC2A2 ELISA kit

苏丹II/苏丹2/溶剂橙7  Sudan II /Solvent Orange 7  质量规格：BS 大鼠肉毒碱脂酰转移酶(CACT)试剂盒 Rat carnitine-acylcarnitine anslocase,CACT ELISA Kit

苏丹Ⅲ/苏III/溶剂红23  Sudan3  质量规格：BS 大鼠肉碱试剂盒 Rat Total Carnitine ELISA Kit

苏丹Ⅳ/苏4/溶剂红24  Sudan IV/Solvent Red 24  质量规格：BS 大鼠肉碱棕榈酰转移酶-Ⅰ(CPT1)试剂盒 Rat Carnitine palmitoylansferase I,CPT1 ELISA kit

油红O/溶剂红27/苏5B  Oil red O/Solvent Red 27   质量规格：BS 大鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA检测试剂盒RatLactoferrin,LTF/LFELISAkit 96T/48T

苏G/溶剂红1/油红113  Sudan red G/Solvent Red 1  质量规格：BS 大鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)试剂盒 Rat Lactoferrin,LTF/LF ELISA kit

/溶剂黑3  Sudan Black B /Solvent Black 3  质量规格：BS(生物染色) 大鼠软骨寡聚基质蛋白(COMP)试剂盒 Rat cailage oligomeric maix protein,COMP ELISA Kit

苏B  Sudan Red B/Solvent Red 25  质量规格：AR 大鼠*腺原氨酸(T3)抗体试剂盒 Rat i-iodothyronine(T3)aibody ELISA kit

苏7B/溶剂红19/脂肪红7B  Sudan Red 7B/Solvent Red 19  质量规格：BS 大鼠*状腺原氨酸(T3)ELISA检测试剂盒Rati-iodothyronine,T3ELISAKit 96T/48T
人肾系膜组织提取物培养兔内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISAkit     4-Aminobutyric acid  中文名：4-氨基丁酸  分子式：C4H9NO2  度：98.0%

兔内皮细胞生长因子elisa试剂盒   兔内皮细胞生长因子试剂盒   规格型号：96T/48T   兔内皮细胞生长因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔内皮细胞生长因子试剂盒、兔内皮细胞生长因子elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  5-Benzyloxyindole  中文名：5-苄氧基吲哚  分子式：C15H13NO  度：98.0%

兔内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒     5-Benzyl-1H-tetrazole  中文名：5-苄基-1H-四唑  分子式：C8H8N4O  度：98.0%

兔内皮细胞生长因子(VEGF)ELISAKit                 6-Hydroxyrubiadin  中文名：6-羟基甲基异茜草素  分子式：C15H10O5 

兔内皮生长因子(rabbit VEGF)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  5-Chloro-4-methoxy-2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carbonitrile  147619-40-7  中文名：  分子式：C7H5ClN2O2

注意事项；

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。