人肺癌组织源细胞说明书

人肺癌组织源细胞【Human Cancer: Lung Cancer Tissues CellsDerivatives】

人肺癌组织源细胞提取物是从人原代肺癌组织源细胞提取的，人原代肺癌组织源细胞从人肺癌组织制备。人肺癌组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

 实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

三聚胺Elisa检测试剂盒96Bathophenanthroline16621红菲绕啉

苏丹红Elisa检测试剂盒964'-Amino',5'-dichloroacetophenone3714883',5'-二氯'-乙酮

β-激动剂Elisa检测试剂盒962-Amino-chloropurine312-氨基-氯嘌呤

莱克多巴胺Elisa检测试剂盒96Acetophenone tosylhydrazone45451苯乙酮对甲苯磺酰基腙

皮质类固醇Elisa检测试剂盒962-Amino-chlorobenzothiazole1995272-氨基-氯苯并噻唑
mouse Activin A   作用：   ELISA   规格：   96T   *     Otophylloside F  250217-73-3  中文名：青阳参苷F  分子式：C48H76O16 

MiniELGelExactionKit   100T  Androst-5-en-3-ol-7,17-dione acetate  1449-61-2  中文名：7-酮基去氢表雄酮醋酸酯  分子式：C21H28O4 

MiniEleDNAKit   100T                 Androst-2-en-17-one  中文名：5α-雄甾-2-烯-17-酮  分子式：C19H28O 

M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒   Rapid exaction kit for M13 phage single chain genomic DNA  Panaxyne  中文名：  分子式：C14H20O2 

L-异亮酸   10g  Vildagliptin  274901-16-5  中文名：维达列汀  分子式：C17H25N3O2  度：98.0%  关键词：
盐酸左西替利嗪  Levoceitrizine HCl  质量规格：>99%,BR 小鼠葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

盐酸西替利嗪（标准品）  Cetirizine Hydrochloride  质量规格：含量测定 小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA检测试剂盒MouseGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide,GIPELISAKit 96T/48T

盐酸雷莫司琼（标准品）  Ramosetron hydrochloride  质量规格：含量测定 小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒 ，英文名： GIP ELISA Kit

*度酸（标准品）  Etodolac  质量规格：含量测定 小鼠葡萄糖转运蛋白2(GL2)ELISA试剂盒 ，英文名： GL2 ELISA Kit

标准品）  Amfebutamone Hydrochloride  质量规格：含量测定 小鼠葡萄糖转运蛋白4(GL4)ELISA试剂盒 ，英文名： GL4 ELISA Kit

盐酸罗格列酮（标准品）  rosiglitazone hydrochloride  质量规格：HPLC法含量测定 小鼠迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

苯马隆（标准品）  BENZBROMARONE  质量规格：含量测定 小鼠前白蛋白(PA)ELISA试剂盒 ，英文名： PA ELISA Kit

盐酸布替萘芬（标准品）  Butenafine HCl  质量规格：HPLC法含量测定 小鼠前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)ELISA试剂盒 ，英文名： PCSK9 ELISA Kit

盐酸托烷司琼（标准品）  Tropisetron hydrochloride  质量规格：HPLC>98%,标准品 小鼠前动力蛋白2(PK2)ELISA试剂盒 ，英文名： PK2 ELISA Kit

盐酸托烷司琼  Tropisetron hydrochloride  质量规格：>98%,BR 小鼠前动力蛋白受体1(PKR1)ELISA试剂盒 ，英文名： PKR1 ELISA Kit
人肺癌组织源细胞说明书Withaperuvin C  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  兔基质金属蛋白酶 1   英文名称：   Rabbit Maix Metalloproteinase 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   MMP-1

Otophylloside O  中文名：  分子式：C56H84O20  度：96.5%  兔基质金属蛋白酶 2   英文名称：   Rabbit Maix Metalloproteinase 2   规格：   48T/96T   英文缩写：   MMP-2

Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H84O20  度：92.0%  兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISAKit  

Otophylloside F  中文名：青阳参苷F  分子式：C48H76O16  度：95.0%  兔(NO)ELISAKit  

Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H90O19  度：98.0%  兔补体蛋白3(C3)ELISAKit

 运输和保存：
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。