大鼠肺大静脉内皮细胞提取物培养

大鼠肺大静脉内皮细胞提取物【Rat Lung: Normal Vein Endothelial Cell Derivatives】

大鼠肺大静脉内皮细胞提取物是从大鼠肺大静脉内皮细胞提取的，大鼠肺大静脉内皮细胞从正常大鼠肺大静脉组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

 实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

鸡源性成分单重荧光PCR检测试剂盒（定量）（不含提取）482-Amino-benzyloxypyridine21632-氨基-苄氧基吡啶

猪源性成分单重荧光PCR检测试剂盒（定量）（不含提取）48N-(4-Aminobenzoyl)-β-alanine7377/8/4对甲酰-β-丙氨酸

马源性成分单重荧光PCR检测试剂盒（定量）（不含提取）482-(2-Aminoethyl)-methylpyrrolidine51382-(2-氨乙基)-N-甲基

驴源性成分单重荧光PCR检测试剂盒（定量）（不含提取）485-Aminofluorescein332645-氨基荧光素

鼠源性成分单重荧光PCR检测试剂盒（定量）（不含提取）484-Amino,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide5229844-氨基,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺
HumanEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGFELISA试剂盒人腺来源的内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒规格：96T/48T  (tert-Butoxycarbonyl)oxycefcapene pivoxil  105889-80-3  中文名：  分子式：C28H37N5O10S2 

HumanelonginA,EloAELISA试剂盒人延伸蛋白A(EloA)ELISA试剂盒规格：96T/48T  (Z)-Butylidenephthalide  中文名：  分子式：C12H12O2 

Humanelecon-ansfer-flavoproteinbetapolypeptide,ETFBELISA试剂盒人电子转移黄素蛋白β肽(ETFB)ELISA试剂盒规格：96T/48T  1-(2-Amino-5-chlorophenyl)-1-(trifluoromethyl)-3-cyclopropyl-2-propyn-1-ol  209414-27-7  中文名：  分子式：C13H11ClF3NO 

HumanElastin,ELNELISA试剂盒人弹性蛋白(ELN)ELISA试剂盒规格：96T/48T  1-(2-Chloroacetyl)pyrrolidine-2-carbonitrile  中文名：  分子式：C7H9ClN2O 

HumanElastaseELISA试剂盒人弹性蛋白酶(Elastase)ELISA试剂盒规格：96T/48T  1,18-Octadecanediol  中文名：  分子式：C18H38O2
外消旋西他列汀  rac-Sitagliptin  质量规格：美国进口 英文名称RatHRAbIgGELISAKit大鼠抗心肌抗体IgG(HRAbIgG)规格：96T/48T

西他列汀  Sitagliptin Phosphate  质量规格：美国进口 英文名称RatHRAbIgGELISAKit大鼠抗心肌抗体IgG(HRAbIgG)规格：96T/48T

西他列汀N-硫酸盐  Sitagliptin N-Sulfate  质量规格：美国进口 英文名称RatHRAbIgMELISAKit大鼠抗心肌抗体IgM(HRAbIgM)规格：96T/48T

西他列汀氨基甲酰β-D-葡萄糖苷酸  Sitagliptin Carbamoyl β-D-Glucuronide  质量规格：美国进口 英文名称RatHRAbIgMELISAKit大鼠抗心肌抗体IgM(HRAbIgM)规格：96T/48T

壮观霉素盐酸盐  Spectinomycin hydrochloride  质量规格：美国进口 英文名称RatIerferonαELISAKit大鼠干扰素α(IFNα)ELISAKit规格：96T/48T

硫酸壮观霉素四水化合物  Spectinomycin sulfate tetrahydrate  质量规格：美国进口 英文名称RatIerferonαELISAKit大鼠干扰素α(IFNα)ELISAKit规格：96T/48T

坦索罗辛  tamsulosin  质量规格：美国进口 英文名称RatinducibleniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠诱导型合成酶(iNOS)规格：96T/48T

(S)-坦索罗辛盐酸盐  (S)-Tamsulosin Hydrochloride  质量规格：美国进口 英文名称RatinducibleniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠诱导型合成酶(iNOS)规格：96T/48T

替米沙坦-d3  Telmisartan-d3  质量规格：美国进口 英文名称RatInhibinAELISAKit大鼠抑制素A(INHA)规格：96T/48T

替米沙坦酰基-β-D-葡萄糖苷酸-d3  Telmisartan-d3 Acyl-β-D-glucuronide  质量规格：美国进口 英文名称RatInhibinAELISAKit大鼠抑制素A(INHA)规格：96T/48T
大鼠肺大静脉内皮细胞提取物培养人膜联蛋白A5(ANXA5)酶联吸附测定试剂盒   Human ANXA5 (Annexin A5) ELISA Kit  3,4-Dihydro-3,4-dihydroxynaphthalen-1(2H)-one  中文名：  分子式：C10H10O3  度：97.0%

人酶VB(CA5B)酶联吸附测定试剂盒   Human CA5B (Carbonic Anhydrase VB, Mitochondrial) ELISA Kit  2-Aminofluorene  中文名：2-氨基芴  分子式：C13H11N  度：99.0%

人瘤病毒58（HPV-58）ELISA试剂盒     3-(Hydroxymethyl)-3-nitro-1-(4-octylphenyl)-1,4-butanediol  中文名：  分子式：C19H31NO5  度：98.0%

人瘤病毒18（HPV-18）ELISA试剂盒              3-(Hydroxymethyl)-3-nitro-1-(4-octylphenyl)-1,4-butanediol  中文名：  分子式：C19H31NO5 

人可溶性转铁蛋白受体   英文名称：   soluable ansferritin receptor   规格：   48T/96T   英文缩写：   sTFeR  Rivaroxaban  中文名：利伐沙班  分子式：C19H18ClN3O5S

运输和保存：
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。