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PrimaCell™大鼠子宫平滑肌细胞试剂盒培养

PrimaCell™大鼠子宫平滑肌细胞试剂盒培养
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PrimaCell™大鼠子宫平滑肌细胞试剂盒培养在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
  PrimaCell™大鼠子宫平滑肌细胞试剂盒培养的详细资料:

产品名称

PrimaCell™大鼠子宫平滑肌细胞试剂盒培养

英文名称

 

货号

EYX99664

PrimaCell™大鼠子宫平滑肌细胞试剂盒

总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。

 

实验要点及说明;

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

 

操作要点;

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

英文名称HumapPELISAKit人血栓前体蛋白(TpP)规格:96T/48T  911819-08-4OphiopojaponinC厂家  Ophiopojaponin C

化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒20  19885-10-0泽泻醇A说明书  Alisol A

RatInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISA试剂盒大鼠胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T  18674-16-3泽泻醇A-24-醋酸酯品牌  Alisol A 24-acetate

小鼠再生基因蛋白1a(REG-1a)ELISA试剂盒 ,英文名: REG-1a ELISA Kit  17306-46-6野漆树苷规格  Rhoifolin

小鼠凝血因子Ⅱ(F)ELISA检测试剂盒Mousecoagulationfactor,FELISAKit 96T/48T  122413-01-8鸡屎藤苷酸甲酯厂家  paederosidic acid methyl ester
2009-24-7花椒毒酚规格  Xanthotol   英文名称RatNN-T4ELISAKit大鼠新生甲状腺素(NN-T4)规格:96T/48T

20086-06-0黄独素B品牌  Diosbulbin B   英文名称RatniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠合成酶(NOS)规格:96T/48T

20086-06-0黄独素B规格  Diosbulbin B    英文名称RatniicoxidesyhaseELISAKIT大鼠合成酶(NOS)规格:96T/48T

19908-48-6高丽槐素品牌  Maackiain   英文名称RatNF-kBELISAKit大鼠NF-kB规格:96T/48T

19906-72-0蜂斗菜内酯说明书  Bakkenolide   英文名称RatneuropeptideYELISAKit小鼠神经肽(NPY)规格:96T/48T
小鼠转录激活因子5(ATF5)ELISA试剂盒 ,英文名: ATF5 ELISA Kit  66575-29-9佛司可林规格  Forskolin

犬雌二醇(E2)ELISA检测试剂盒CanineEsadiol,E2ELISAKit 96T/48T  29070-92-6茯苓酸厂家  Pachymic acid

犬胸腺基质细胞生成素(TSLP)试剂盒 Dog TSLP ELISA Kit  303-98-0辅酶Q10说明书  Coenzyme Q10

英文名称Humaissue-typePlasminogenActivator(t-PA)ELISAkit人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒规格:96T/48T  58749-22-7甘草查尔酮A品牌  Licochalcone A

超强AP酶联检测封闭溶液10毫升  58749-23-8甘草查尔酮B规格  Licochalcone B
PrimaCell™大鼠子宫平滑肌细胞试剂盒培养6812-81-3栎瘿酸规格  Roburic acid   组蛋白H3-S311酸化检测试剂盒10/20

6807-83-6三叶豆紫檀苷品牌  Trifolirhizin  组蛋白H3-S281酸化检测试剂盒10/20

6807-83-6三叶豆紫檀苷厂家  Trifolirhizin   组蛋白H3-S101酸化检测试剂盒10/20

68027-15-64补充中2品牌  hederagenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(12)-(β-D-glucopyranosyl(14))-α-L-arabinopyranoside   组蛋白H3-K9甲基化共沉淀分析试剂盒5

67979-25-3橙黄决明素品牌  Aurantio-obtusin   组蛋白H3-K9(mono/di/i)甲基化检测试剂盒10/20

运输和保存;
视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。

 

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