我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分产品现货,超低比价,产品货期短,价格优,售后齐全。 产品名称 | 英文名称 | 货号 | PrimaCell™大鼠膀胱成纤维细胞试剂盒培养 | | EYX99656 |
PrimaCell™大鼠膀胱成纤维细胞试剂盒 总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。 cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA第一链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证了产品的质量。 蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。 细胞培养方法; 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
实验事项; 1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。 2. 加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。 3. 孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。 4. 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。 5. 试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。 6. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。 7. 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。 MouseActivinA,ACV-AELISA试剂盒小鼠活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒规格:96T/48T 83-49-8猪去氧胆酸 Hyodeoxycholic acid 小鼠粘蛋白/粘液素1(MUC1)ELISA试剂盒 ,英文名: MUC1 ELISA Kit 89412-79-3竹节香附素A说明书 Raddeanin A 小鼠内(ET)ELISA检测试剂盒Mouseendotoxin,ETELISAKit 96T/48T 517-88-4紫草素品牌 shikonin 人相关抗原7(SPAG7)试剂盒 Human sperm associated aigen 7,SPAG7 ELISA Kit 28831-65-4紫草酸规格 Lithospermic acid RatAndrostenedione,ASDELISAKit大鼠雄烯二同(ASD)ELISA试剂盒规格:96T/48T 118-34-3紫丁香苷 Syringin 219944-46-4七叶皂苷D品牌 AescinIIB 英文名称RatProlactinELISAKit大鼠促乳素(Prolactin)规格:96T/48T 21967-41-9黄芩苷品牌 Baicalin 英文名称RatProinsulinELISAKit大鼠胰岛素原(PI)规格:96T/48T 21967-41-9黄芩苷品牌 Baicalin 英文名称RatProinsulinELISAKit大鼠胰岛素原(PI)规格:96T/48T 2188-68-3盐酸石蒜碱规格 Lycorine chloride 英文名称RatProgesteroneELISAkit大鼠孕激素(Progesterone)ELISAkit规格:96T/48T 2182-14-1文多灵品牌 Vindoline 英文名称RatProgesteroneELISAkit大鼠孕激素(Progesterone)ELISAkit规格:96T/48T 小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)ELISA试剂盒 ,英文名: NE ELISA Kit 508-02-1齐墩果酸规格 Oleanolic acid 小鼠二(MDA)ELISA检测试剂盒Mousemalondialchehyche,MDAELISAKit 96T/48T 52659-56-0奇任醇 Kirenol 人军团菌抗体IgG(LP Ab-IgG)试剂盒 Human Legionella aibody IgG,LP Ab-IgG ELISA Kit 千层纸素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷说明书 Oroxylin A 7-O-glucuronide RatactivatedproteinC,APCELISAKit大鼠活化蛋白C(APC)ELISA试剂盒规格:96T/48T 480-11-5千层纸素A品牌 Oroxylin A 载玻片细胞RyR受体蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20 481-49-2千金藤素规格 Cepharanthine PrimaCell™大鼠膀胱成纤维细胞试剂盒培养62956-48-3戈米辛G规格 Gomisin G 转基因玉米MON810品系试剂盒20 62596-29-6桑辛素 Morusin 转基因玉米MON802品系试剂盒20 62499-28-9巴利森苷B说明书 Parishin B 转基因玉米CBH351(starlink)品系试剂盒20 62499-28-9巴利森苷A品牌 Coniferin 转基因玉米Bt-Xa品系试剂盒20 62499-27-8天麻素品牌 Gastrodin 转基因玉米Bt176(maximizer)品系试剂盒20 注意事项; 1. 接收到,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。 2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。 3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。 4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。 5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。 6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。 7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。 |