人结肠组织提取物培养

人结肠组织提取物【Colon: Normal Human Colon Derivatives】

结肠围绕在小肠周围，始于盲肠终于直肠，分为升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠四部分。公司科技提供来自新鲜或冷冻人结肠组织中高质量的总RNA，PCR准备的第一条cDNA链，蛋白质及其亚组分。这些临床定义的正常人体组织标本采集自各地方医院，采集工作根据IRB和HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

 实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

八连管光学盖1条/包Bis[4-(dimethylamino)phenyl]methane11双[4-(二甲氨基)苯基]甲烷

玻璃三角瓶 带扰流挡板2ml/0ml/00ml4,4'-Bis(chloromethyl)biphenyl1664,4'-双(氯甲基)

玻片镊子把2,2-Bis(hydroxymethyl)butyric acid09722,2-二羟甲基丁酸

不锈钢酒精灯0ml3',6'-Bis(diethylamino)-(4-nitrophenyl)spiro[isoindole,9'-xanthene]-one2919993',6'-双(二乙氨基)-(4-基)螺[异吲哚,9'-氧杂蒽]-酮

不锈钢涂布棒1,3-Bis(4,5-dihydro-oxazolyl)benzene351,3-双(4,5-二氢-恶唑)苯
Ethyl 2-(4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate  中文名：  分子式：C13H13NO3S    猪可溶性细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISAKit  

Ethyl 2-(3-formyl-4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate  中文名：  分子式：C14H13NO4S    猪巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISAKit               

Ethyl 2-(3-cyano-4-isobutoxyphenyl)-4-methyl-5-thiazolecarboxylate  中文名：  分子式：C18H20N2O3S    猪球蛋白Gelisa试剂盒   猪球蛋白G试剂盒   规格型号：96T/48T   猪球蛋白G试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：猪球蛋白G试剂盒、猪球蛋白Geisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Ethyl 2-(3-cyano-4-hydroxyphenyl)-4-methyl-1,3-thiazole-5-carboxylate  中文名：  分子式：C14H12N2O3S    猪球蛋白Eelisa试剂盒   猪球蛋白E试剂盒   规格型号：96T/48T   猪球蛋白E试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：猪球蛋白E试剂盒、猪球蛋白Eeisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Ethyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C23H19N3O4    猪流行性腹泻病毒抗体elisa试剂盒   猪流行性腹泻病毒抗体试剂盒   规格型号：96T/48T   猪流行性腹泻病毒抗体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：猪流行性腹泻病毒抗体试剂盒、猪流行性腹泻病毒抗体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
神经肽Y（2-36），人，大鼠  Neuropeptide Y (2-36) (human,rat)  质量规格：>95%,BR 小鼠戊糖素(Peosidine)ELISA试剂盒 ，英文名： Peosidine ELISA Kit

神经肽Y（22-36）  Neuropeptide Y (22-36)  质量规格：>95%,BR 小鼠硒蛋白M(SELM)ELISA试剂盒 ，英文名： SELM ELISA Kit

神经肽Y（3-36），猪  Neuropeptide Y (3-36)(porcine)  质量规格：>95%,BR 小鼠硒蛋白P1(SEPP1)ELISA试剂盒 ，英文名： SEPP1 ELISA Kit

骨钙素（7-19），人  Osteocalcin (7-19) (human)  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞程序性死亡蛋白1配体1(PDCD1LG1)ELISA试剂盒 ，英文名： PDCD1LG1 ELISA Kit

成骨生长肽  Osteogenic Growth Peptide  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞毒性T细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA试剂盒 ，英文名： CTLA-4/CD152 ELISA Kit

骨抑制素，人  Osteostatin (human)  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞分裂周期因子25(CDC25)ELISA试剂盒 ，英文名： CDC25 ELISA Kit

骨抑制素（1-5）酰胺，人，牛，狗，大鼠，小鼠，兔，马  Osteostatin (1-5) amide(human, bovine, dog, horse,mouse, rabbit, rat)  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞骨架活性调节蛋白(ARC)ELISA试剂盒 ，英文名： ARC ELISA Kit

骨抑制素酰胺，人  Osteostatin amide (human)  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞间粘附分子1(ICAM1)ELISA试剂盒 ，英文名： ICAM1 ELISA Kit

p60 v-结构域（137-157）  p60 v-src (137-157)  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA检测试剂盒Mouseiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1ELISAKIT 96T/48T

p60 C-结构域底物ⅠLys(生物素)  p60c-src Substrate ILys(Biotin)  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA试剂盒 ，英文名： ICAM-1/CD54 ELISA Kit
人结肠组织提取物培养兔补体蛋白3elisa试剂盒   兔补体蛋白3试剂盒   规格型号：96T/48T   兔补体蛋白3试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔补体蛋白3试剂盒、兔补体蛋白3 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  4-Bromomethyl-2-cyanobiphenyl  114772-54-2  中文名：  分子式：C14H10BrN  度：98.0%  关键词： 

兔补体蛋白3(C3)ELISAKit     5-Chloro-4-methoxy-2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carbonitrile  中文名：  分子式：C7H5ClN2O2  度：98.0%

兔半胱酸蛋白酶抑制剂elisa试剂盒   兔半胱酸蛋白酶抑制剂试剂盒   规格型号：96T/48T   兔半胱酸蛋白酶抑制剂试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔半胱酸蛋白酶抑制剂试剂盒、兔半胱酸蛋白酶抑制剂elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  4-Bromomethyl-2-cyanobiphenyl  114772-54-2  中文名：  分子式：C14H10BrN 

兔半胱酸蛋白酶抑制剂C   英文名称：   Rabbit Cystatin C   规格：   48T/96T   英文缩写：   CSTC  4-Oxododecanedioic acid  中文名：  分子式：C12H20O5 

兔半胱酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA试剂盒     5-(1-Piperazinyl)benzofuran-2-carboxamide  183288-46-2  中文名：  分子式：C13H15N3O2

运输和保存：
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。