小脑颗粒细胞和肿瘤原代细胞提取物培养

小脑颗粒细胞和肿瘤原代细胞提取物【Human Cerebellum MatchPair: Normal Cerebellar Granule Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】

人小脑颗粒细胞和肿瘤原代细胞提取物是从人原代小脑颗粒细胞和肿瘤细胞中提取的，人原代小脑颗粒细胞和肿瘤细胞分别从正常人小脑组织和肿瘤组织中制备。正常人小脑组织和肿瘤组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

 实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

布鲁氏杆菌抗体检测试纸条卡/包，包/盒Fenbendazole4327芬苯达唑

小反刍兽疫病毒抗体检测试纸条卡/包，包/盒Fenazox616187氨芬酸钠

小反刍兽疫抗体ELISA检测试剂盒96TFelodipine7296非洛地平

牛口蹄疫抗体ELISA检测试剂盒96TFebuxostat143非布索坦

牛羊布病抗体ELISA检测试剂盒96TFalcarinol2185
Febuxostat  144060-53-7  中文名：非布索坦  分子式：C16H16N2O3S  度：98.0%  关键词：    小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin2(Eotaxin2/CCL24)ELISA试剂盒  

Falcarinol  21852-80-2  中文名：  分子式：C17H24O  度：%  关键词：    小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISA试剂盒           

Falcarindiol  55297-87-5  中文名：  分子式：C17H24O2  度：97.0%  关键词：  抗真菌; 抗生素; 镇痛; DNA拓扑异构酶抑制剂; 当归; 聚乙炔; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)ELISAKit  

Ezetimibe  BBP80298  中文名：依泽替米贝  分子式：C24H21F2NO3  度：98.0%  关键词：    小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISAKit  

Exemestane  107868-30-4  中文名：依西美坦  分子式：C20H24O2  度：98.0%  关键词：    小鼠细胞因子ELISAKit
石英砂(AR,6-10目或2-3mm)  Sand  质量规格：AR,6-10目或2-3mm 犬胰腺甘油三酯脂酶(PNLIP)试剂盒 Dog Pancreatic iacylglycerol lipase,PNLIP ELISA kit

石英砂(AR,8-16目或1-2mm)  Sand  质量规格：AR,8-16目或1-2mm 犬乙酰胆碱受体抗体(AChRab)ELISA检测试剂盒Canineacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISAKit 96T/48T

二氢铵(SP)  Ammonium phosphate monobasic  质量规格：SP 犬乙酰胆碱受体抗体(AChRab)试剂盒 Canine acetylcholine receptor aibody,AChRab ELISA Kit

二甲基亚砜(光谱级，>99.9% (GC))  Dimethyl sulfoxide  质量规格：光谱级，>99.9% (GC) 犬乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA检测试剂盒CaninehepatitisBvirussurfaceaigen,HBsAgELISAKit 96T/48T

N,N-二甲基乙酰胺(光谱级,≥99.8%(GC))  N-N-Dimethylacetamide  质量规格：光谱级,≥99.8%(GC) 犬乙型肝炎表面抗原(HBsAg)试剂盒 Canine hepatitis B virus surface aigen,HBsAg ELISA Kit

二甲基亚砜(ACS,光谱级)  Dimethyl sulfoxide  质量规格：ACS,光谱级 犬抑制素β-B(Inhbb)试剂盒 Canine inhibin beta-B,Inhbb ELISA Kit

乙二醇(光谱 ,≥99%)  Ethylene glycol  质量规格：光谱 ,≥99% 犬游离甲状腺素(FT4)试剂盒 Canine Free Thyroxine,FT4 ELISA Kit

甘油(for spectroscopy,≥99.5%)  Glycerol in water for HPLC verification  质量规格：for spectroscopy,≥99.5% 犬游离*状腺原氨酸(Free-T3)试剂盒 Canine Free i-iodothyronine Indes,Free-T3 ELISA Kit

碳酸锂(SP)  Lithium carbonate  质量规格：SP 犬游离脂肪酸(FFA)试剂盒 Dog free fatty acids,FFA ELISA kit

新亚铜试剂盐酸盐一水合物(99%)  Neocuproine hydrochloride monohydrate  质量规格：0.99 犬诱导型合成酶(iNOS)试剂盒 Dog inducible niic oxide syhase,iNOS ELISA Kit
小脑颗粒细胞和肿瘤原代细胞提取物培养土壤纤维素酶（S-CL）测试盒   可见分光光度法   50管/24样  4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  2374-03-0  中文名：4-氨基-3-羟基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%   

土壤无机0（S-PHOS）含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样  4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  116-63-2  中文名：4-氨基-3-羟基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S  度：98.0%   

土壤无机0（S-PHOS）含量测试盒   可见分光光度法   50管/24样  4-Aminoantipyrine  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O  度：99.0%

土壤脱氢酶(SDHA)测试盒   可见分光光度法   50管/24样              4-Aminoantipyrine  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O 

土壤酸性蛋白酶试剂盒   可见分光光度法   50管/24样  4-Amino-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide  中文名：4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺  分子式：C14H16N2O4S  度：99.0%

运输和保存：
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。