大鼠表皮组织提取物培养

大鼠表皮组织提取物【Skin: Normal Rat Epidermal Derivatives】

表皮组织是由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。公司科技提供来自新鲜或冷冻大鼠表皮组织中高质量的总RNA，PCR准备的第一条cDNA链，蛋白质及其亚组分。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

ml平底螺口离心管(国产)个/袋Benzyl carbazate53313肼基甲酸苄酯

ml圆底插口离心管(国产)25个/包 5-Benzoylpentanoic acid414425-苯甲酰基戊酸

ml圆底螺口高速离心管 PP6个/包 7-Benzyloxyindole28977-苄氧基吲哚

ml圆底内螺口离心管(国产)个/包 N-Benzylcinchonidinium chloride692574N-化辛可宁丁

mm微孔滤膜(国产，0.22μm/0.45μm)4,4'-Biphenyldicarboxylic acid784,4'-二甲酸
Catalpalactone  1585-68-8  中文名：  分子式：C15H14O4  度：%  关键词：  中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)ELISA试剂盒  

Carvedilol  72956-09-3  中文名：卡维地洛  分子式：C24H26N2O4  度：98.0%  关键词：    小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)ELISA试剂盒  

Cardenolide B-1  1318158-89-2  中文名：  分子式：C30H44O8  度：98.0%  关键词：  强心苷; 甾苷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠尿蛋白（UP）ELISA试剂盒           

Carbasalate calcium  5749-67-7  中文名：卡巴匹林钙  分子式：C19H18CaN2O9  度：98.0%  关键词：    小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体   英文名称：   urokinase-plasmingen activator receptor   规格：   48T/96T   英文缩写：   uPA-R

Capecitabine-2',3'-cyclic carbonate  921769-65-5  中文名：卡培他滨  分子式：C16H20FN3O7  度：98.0%      小鼠超敏感度促甲状腺素   英文名称：   Mouse ulasensitive Thyroid Stimulating Hormone   规格：   48T/96T   英文缩写：   U.TSH
氯美扎酮（标准品）  Chlormezanone  质量规格：UV法溶出度检查 小鼠内(ET)ELISA检测试剂盒Mouseendotoxin,ETELISAKit 96T/48T

氢钙（标准品）  Calcium hydrogenphosphate dihydrate  质量规格：UV法含量测定 小鼠内(ET)ELISA试剂盒 ，英文名： ET ELISA Kit

磺胺二甲嘧啶 （标准品）  Sulfamethazine  质量规格：含量测定 小鼠腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA检测试剂盒MouseEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGFELISAKit 96T/48T

磺胺脒（标准品）  Sulfaguanidine  质量规格：HPLC法含量测定 小鼠腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒 ，英文名： EG-VEGF ELISA Kit

芬布芬（标准品）  Fenbufen  质量规格：含量测定 小鼠腺来源血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒 ，英文名： EG-VEGF ELISA Kit

曲克芦丁（标准品）  Troxerutin  质量规格：HPLC法含量测定 小鼠内磺肽α(ENSα)ELISA试剂盒 ，英文名： ENSα ELISA Kit

二羟丙茶碱（标准品）  Diprophylline  质量规格：含量测定 小鼠内凝集蛋白1(ITLN1)ELISA试剂盒 ，英文名： ITLN1 ELISA Kit

盐酸地巴唑（标准品）  Bendazol hydrochloride  质量规格：HPLC法含量测定 小鼠内皮素1(EDN1)ELISA试剂盒 ，英文名： EDN1 ELISA Kit

氯喹（标准品）  Chloroquine diphosphate  质量规格：HPLC法含量测定 小鼠内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒 ，英文名： ET-1 ELISA Kit

盐酸异丙嗪（标准品）  Promethazine Hydrochloride  质量规格：含量测定 小鼠内皮素转化酶1(ECE1)ELISA试剂盒 ，英文名： ECE1 ELISA Kit
大鼠表皮组织提取物培养虾特定基因序列(FC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T  Aspergillon A  2239299-08-0  中文名：  分子式：C22H32O  度：98.0%  关键词： 

虾特定基因序列(FC)核酸检测试剂盒   48T  Aspergillon A  2239299-08-0  中文名：  分子式：C22H32O 

虾胺/酚   英文名称：   Octopamine   规格：   48T/96T   英文缩写：   OPM  Aspartame  22839-47-0  中文名：阿司帕坦  分子式：C14H18N2O5  度：98.0%  关键词： 

细小病毒(PPV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T  Artesunate  88495-63-0  中文名：青蒿琥酯  分子式：C19H28O8  度：98.0%  关键词： 

细小病毒(PPV)核酸检测试剂盒   48T  Artesunate  88495-63-0  中文名：青蒿琥酯  分子式：C19H28O8

运输和保存；
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。