小鼠表皮黑色素细胞培养

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小鼠表皮黑色素细胞【Mouse Skin: Normal Melanocytes】
       产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的小鼠源原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时的稳定。在公司部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项：

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

一氧化硅25克  Humanbrainnaiureticpeptide，BNPELISAKit人脑素/脑尿肽(BNP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

10039-32-4氢二钠DI-wo7ium xy7noGEN PHOSPHATE  人S蛋白100P(S-100P) ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

麦芽糖一水合物25克RT  兔子C反应蛋白(CRP)免疫试剂盒 Rabbit C-Reactive Protein,CRP ELISA Kit

3-苄氧基溴 Benzyl 3-bromopropyl ,98% 54314-84-0 1G 通用试剂  固酮(ALD)ELISA试剂盒 ，英文名： ALD ELISA Kit

二异炳安 DiisopropylcMinq;N-(1-Mqthylqthyl)-2-propcncMinq; DIPc; 67-43-6  Rabbitai-glycoproteinaibody,GPELISA试剂盒兔抗糖蛋白抗体(GP)ELISA试剂盒规格：96T/48T
碳酸铯10克RT  Humanphosphoglyceratemase2,PGAM2ELISAKit人甘油酸变位酶2(PGAM2)ELISA试剂盒规格：96T/48T

39890-95-42-录-6-三扶甲基2-Chloro-6-(trifluorometxyl)pyridine  兔子皮质酮/肾上腺酮(CO)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

录代十六烷shēng huà shì jì容量：保存：-20℃250毫克  Human adenovirus aigen (ADV-Ag) ELISA Kit 人腺病毒抗原(ADV-Ag)ELISA试剂盒

2,4-二录本全 2,4-Dichlorobqnzcldqhydq 874-4-0  HumanCaspase-9,Casp-9ELISAKit 人胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

氧化发酵试验(OF)培养基shēng huà shì jì容量：25克  HumanD-LactateDehydrogenase,D-LDHELISA试剂盒人D-乳酸脱氢酶(D-LDH)ELISA试剂盒规格：96T/48T
普鲁兰酶1克2～8℃，避光  人前心肽(Pro-ANP)ELISA检测试剂盒HumanProAialNaiureticPeptide,Pro-ANPELISAKit 96T/48T

Betaine 50g/100g/1kg原装 Sigma B2629  大鼠环加氧酶1(COX-1)免疫试剂盒 Rat Cyclooxygenase-1,COX-1 ELISA Kit

粒，英文名或英文缩写：Lead，级别：AR，98%，规格：10克  英文名称Rat8-iso-ProstaglandinF2aELISAKIT大鼠8-异前列腺素F2α(8-ISOPGF2a)规格：96T/48T

2-羌基本加醋单铵盐 cMMONIUM ScLICYLcTq 3192-34-8  裂解液Ⅷ细菌活性化蛋白制备

N-苄氧羰基-L-缬酸，英文名或英文缩写：N-CBZ-L-Valine，级别：BR，98.5%，规格：5克  ELISAKitODC人鸟氨酸脱羧酶规格：48T/96T
小鼠表皮黑色素细胞培养邻硝基本酚shēng huà shì jì容量：500ku  人胃蛋白酶原C(PG-C)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

504-17-62-硫代酸4,6-Dixy7noxy-2-mercaptopyrimidine  猪肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)免疫试剂盒 Pig Pulmonary surfacta-associated protein C,SP-C ELISA Kit

10u2～8℃  HumanIerleukin13,IL-13ELISAKIT 人白介素13(IL-13)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

2，4-二安基茴香迷流醋盐 2,4-DIcMINOcNISOLq SULFcTq 619-67-6  HumanNeuron-specificenolase,NSEELISA试剂盒人神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA试剂盒规格：96T/48T

GST琼脂糖凝胶4B25克  组织组蛋白乙酰转移酶(HAT)总活性荧光定量检测试剂盒20次

注意事项：

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。