大鼠食管组织提取物培养

大鼠食管组织提取物【Rat Esophagus: Normal Esophageal Derivatives】

食管为前、后扁窄的肌性管道，按其行程可分为颈部、和腹部三部。公司科技提供来自新鲜或冷冻大鼠食管组织中高质量的总RNA，PCR准备的第一条cDNA链，蛋白质及其亚组分。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

实验要点及说明；

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点；

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

Casein enzymatic hydrolysate酶水解酪蛋白   0g2,2-Bis(4-chlorophenyl),1-dichloroethylene7252,2-双(4),1-二氯乙烯

Casein 酪蛋白   0g 2,2-Bis(4-chlorophenyl),1-dichloroethane7242,2-双(4-氯),1-二氯乙烷

CDP 5’-二磷酸胞苷钠盐水合物   mg2,2-Bis(4-chloroformyloxyphenyl)propane2482,2-双(4-氯甲酰氧苯基)丙烷

Cefotaxime  Salt噻孢霉素钠盐/头孢噻肟钠盐   5g /25g /g 2,2-Bis(3-amino-hydroxyphenyl)hexafluoropropane8355872,2-双(3-氨基-羟苯基)六氟丙烷

CHAPS   1g/5g2,2'-Biquinoline11912,2'-联
Clopidogrel bisulfate  中文名：硫酸氢氯吡格雷  分子式：C16H18ClNO6S2  度：98.0%  肺表面活性物质相关蛋白 A(SP-A)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

Cefotaxime   中文名：头孢噻肟钠  分子式：C16H17N5NaO7S2  度：98.0%  胸腺和活化调节趋化因子 (TARC)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

Triamcinolone acetonide  中文名：曲安奈德  分子式：C24H31FO6  度：98.0%  胸腺表达化学因子 (TECK)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装   

Tryptophan  中文名：  分子式：C11H12N2O2  度：98.0%  酰基转移酶（AAT）试剂盒   可见分光光度法   50管/48样

4,6-Dichloro-2-(propylthio)pyrimidin-5-amine  中文名：  分子式：C7H9Cl2N3S  度：98.0%  脱羧酶（PDC）试剂盒   紫外分光光度法    50管/48样
木栓酮（标准品）  FRIEDELIN  质量规格：鉴别 小鼠斯钙素1(STC1)ELISA试剂盒 ，英文名： STC1 ELISA Kit

表木栓醇（标准品）  FRIEDELAN-3BETA-OL  质量规格：鉴别 小鼠死亡关联蛋白激酶1(DAPK1)ELISA试剂盒 ，英文名： DAPK1 ELISA Kit

老龙皮酸；网脊衣酸 A（标准品）  (4S)-2α,3β-Dihydroxy-D:C-friedo-B':A'-neogammacer-9(11)-en-23-oic acid  质量规格：鉴别用 小鼠死亡关联蛋白激酶3(DAPK3)ELISA试剂盒 ，英文名： DAPK3 ELISA Kit

焦性没食子酸（标准品）  Pyrogallol  质量规格：含量测定 小鼠四旋蛋白30(TSPAN30)ELISA试剂盒 ，英文名： TSPAN30 ELISA Kit

正十九烷（标准品）   N-NONADECANE   质量规格：内标 小鼠松弛肽(RLN)ELISA试剂盒 ，英文名： RLN ELISA Kit

正十五烷（标准品）  N-PENTADECANE  质量规格：内标 小鼠速激肽受体1(TACR1)ELISA试剂盒 ，英文名： TACR1 ELISA Kit

咖啡酸乙酯（标准品）  ETHYL CAFFEATE  质量规格：含量测定 小鼠速激肽受体2(TACR2)ELISA试剂盒 ，英文名： TACR2 ELISA Kit

柠檬酸无水  Citric acid  质量规格：>99%,AR 小鼠酸激酶(PK)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

柠檬酸无水（标准品）  Citric acid  质量规格：含量测定 小鼠酸激酶(PK)ELISA试剂盒 ，英文名： PK ELISA Kit

硫酸钾（标准品）  Potassium sulfate   质量规格：含量测定 小鼠酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA试剂盒 ，英文名： M2-PK ELISA Kit
大鼠食管组织提取物培养豚鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  2-Acetylbutyrolactone  中文名：2-乙酰基丁内酯  分子式：C6H8O3  度：98.0%

豚鼠白介素10(IL-10)ELISA试剂盒 ，英文名： IL-10 ELISA Kit  2-Acetyl-6-methoxynaphthalene  3900-45-6  中文名：6-甲氧基-2-乙酰萘  分子式：C13H12O2  度：99.0%  关键词： 

豚鼠白介素10(IL10)ELISA试剂盒 ，英文名： IL10 ELISA Kit  2-Acetyl-1H-Isoindole-1,3(2H)-Dione  中文名：2-乙酰基-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮  分子式：C10H7NO3  度：93.0%

豚鼠白介素1(IL-1)ELISA试剂盒 ，英文名： IL-1 ELISA Kit  2-Acetonaphthone  1993/8/3  中文名：2'-萘乙酮  分子式：C12H10O  度：98.0%  关键词： 

豚鼠白蛋白(ALB)ELISA试剂盒 ，英文名： ALB ELISA Kit  2-Acetamido-2-deoxy-D-glucose  中文名：N-乙酰氨基葡萄糖  分子式：C8H15NO6  度：99.0%

运输和保存；
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满*培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。