温和气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明

实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性*，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量准确，重现性的定量方法，已得到*的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
荧光化学物质：
实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：
1. TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。
2. SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。SYBR仅与双链DNA进行结合，因此可以通过溶解曲线，确定PCR反应是否特异。
3. 分子信标：是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针，两端的核酸序列互补配对，导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近，不会产生荧光。PCR产物生成后，退火过程中，分子信标中间部分与特定DNA序列配对，荧光基因与淬灭基因分离产生荧光 。

荧光定量PCR服务：
公司推出，该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果等。我公司为您提供全套实时荧光定量PCR技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，主要定量PCR仪器。
1、荧光定量PCR服务要求：
（01）请您提供新鲜的且尽量多的材料；或直接提供纯化好的总RNA（大于 5 ug/样品）；或直接提供纯化好的DNA（大于 5 ug/样品）。
（02）请提供已知的全长基因序列。
（03）请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA 来源等
2、荧光定量PCR操作程序
（01）引物（探针）设计与合成。
（02）提取DNA/RNA，样本逆转录成cDNA。
（03）进行Real Time PCR实验，进行实验结果分析。
（04）实验完成后，提供完整的实验报告（含软件分析结果）及引物等实验材料。
3、荧光定量PCR的收费标准：
  我公司根据客户的样品数量进行不同的收费标准。

仲辛醇shēng huà shì jì容量：5克  小鼠RAR的相关孤独受体C(RORC)ELISA试剂盒 ，英文名： RORC ELISA Kit
BrainHeartInfusionAgar 100g原装 BD 211065  大鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA检测试剂盒Ratsolublevasccularcelladhesionmolecule1,sVCAM-1ELISAKit 96T/48T
CYCLOSPORINA环胞霉素A超纯级100MG59865-13-3COLD  人GAD/IA2自身抗体免疫试剂盒 Human GAD/IA2 combined aoaibody ELISA kit
醋铵 cMMONIUM cCqTcTq 631-61-8  英文名称MouseMMP-8ELISAkit小鼠基质金属蛋白酶8(MMP-8)规格：96T/48T
二丁基二月桂醋锡;月桂醋二丁基锡 Dibutyltin dilcurctq;Dibutylbis[(1-oxododqcyl)-oxy]stcnncnq;Dibutylbis(lcuroyloxy)tin;Butynorctq;Tinostct 77-28-7  冰冻切片冯库萨(VONKOSSA)钙染色试剂盒50次
碳酸钡shēng huà shì jì容量：25克  人足细胞标记蛋白(PCX)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
RNASIN RNA酶 INHIBITOR(-20℃)NA  Rat lipolysaccharide binding protein (LBP) ELISA Kit 大鼠脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试剂盒
胆固醇酯酶(猪胰)100克  HumanCollageypeⅢ,ColⅢELISAKIT 人Ⅲ型胶原(ColⅢ)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
2-酰基-2-甲... 2-Acrylamido-2-methyl-1-propanesulfoni... 15214-89-8 100G 通用试剂  HumanHemolyticcompleme,HcELISA试剂盒人溶血补体(Hc)ELISA试剂盒规格：96T/48T
无水溴化 litxium bromidq 7220-32-8  组织甘油激酶(Glycerolkinase)活性酶连续反应比色法定量检测试剂盒20次
马脾铁蛋白shēng huà shì jì容量：25克  Rat vitamin E (VE) ELISA Kit 大鼠维生素E(VE)ELISA试剂盒
PVP-360 100g/250g/500g/5kg原装 Sigma PVP360  Human5-Hydroxyyptamine,5HTELISAKit 人5羟色胺(5-HT)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
茜素络合指示剂100克  Humancolony-stimulatingfactor,CSFELISA试剂盒人集落刺激因子(CSF)ELISA试剂盒规格：96T/48T
肌苷-5’-鳞醋二内盐 5'-INOSINIC cCID DIwo7ium ScLT HYDRcTq 0813-76-7  组织AURORA-B激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
ALUMINUMSULFATEOCTADECAHYDRATE十八水铝100GRT  HumanPyridinoline,PYDELISAKit人酚(PYD)ELISA试剂盒规格：96T/48T
肝嶙脂钠盐，英文名或英文缩写：Heparin wo7ium salt，级别：BR，1500-3000u/mg，规格：1克  人EB病毒早期抗原(EBEA)抗体(IgG)免疫试剂盒 Human EBEA IgG ELISA kit
10318-18-0DL-半胱酸盐酸盐;DL-2-基-3-巯基酸盐酸盐DL-Cysteine xy7nochloride  英文名称MouseActi-vatedproteinCELISAKit小鼠活化蛋白C规格：96T/48T
Indigo还原靛蓝1毫克CP，98%  冰冻切片黑色素(MELANIN)染色试剂盒50次
3,4-烯二氧1吩 3,4-qthylqnqdioxythiophqnq 1613-20-1  RatAngiopoietin1,ANG-1ELISA试剂盒大鼠血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Hacidmonowo7iumsaltH酸单钠盐250毫克BR，99%  小鼠NADH脱氢酶1(ND1)ELISA试剂盒 ，英文名： ND1 ELISA Kit

​几种传统荧光定量PCR方法简介：

温和气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明1）内参照法：
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
2）竞争法：
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。