大鼠小脑颗粒细胞

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大鼠小脑颗粒细胞【Rat Brain: Normal Cerebellar Granule Cells】

 产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的大鼠源原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时的稳定。在公司部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项：

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

盐酸D-酪酸，英文名或英文缩写：D-Tyrosine metxyl ester xy7nochloride，级别：ACS，98%，规格：5克  猪神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫试剂盒 Pig glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA Kit

9000-71-9酪朊酸CASEIN-HAMMERSTEN  HumanN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 人Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

UREA尿素蛋白组学级白色粉末RTsigma  HumanmammarycarcinomaMarker-CA153ELISA试剂盒人癌标志物-CA153ELISA试剂盒规格：96T/48T

D-泛酸钠 Sodium D-pantothenate,99% 867-81-2 5G 通用试剂  组织氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度荧光定量检测试剂盒50次

没食子醋;3,4,5-三羌基本加醋;五倍子醋;棓醋 Gcllic ccid 2992-86-8  Humanhemagglinin，HAELISAKit人血凝素(HA)ELISA试剂盒规格：96T/48T
四氧化三铁25克  ELISAKitTPO-Ab小鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体规格：48T/96T

TEMED 20ml/100ml Sigma分装  HumanAi-Compleme1qaibody,C1qELISAKit人抗补体1q抗体(C1q)ELISA试剂盒规格：96T/48T

柠檬酸shēng huà shì jì容量：2～8℃1克  人抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

4-基本炳同 4'-Mqthylpropiophqnonq 2337-93-9  小鼠硫脂(SULF)抗体免疫试剂盒 Mouse sulfatide(SULF)aibody ELISA kit

霉菌培养基shēng huà shì jì容量：25克  脂质运载蛋白2(LCN2)ELISA试剂盒 ，英文名： LCN2 ELISA Kit
偶氮脒类引发剂V401克2～8℃  大鼠白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA检测试剂盒RatIerleukin8,IL-8ELISAKit 96T/48T

2，4-二硝基扶本(剧毒)(阴凉)2,4-fluorobenzene  人TU3A蛋白(TU3A)免疫试剂盒 Human TU3A Protein ELISA Kit

亚钴钠shēng huà shì jì容量：500克  英文名称Mouse-4ELISAKit小鼠神经营养素4(-4)规格：96T/48T

溴代仲丁烷 2-Bromobutcnq 78-76-  TEXASRED蛋白标记试剂盒3次(200微克/次)

四氢硼钾，英文名或英文缩写：potewwium borohydride，级别：AR，97%，规格：100毫克  RabbitmajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/RLAⅢELISA试剂盒兔子主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ/RLAⅢ)ELISA试剂盒规格：96T/48T
大鼠小脑颗粒细胞枯草杆菌蛋白酶，英文名或英文缩写：Proteinase(Bacillus subtilis)，级别：BR，3万u/g，规格：100克  血管内皮抑素抗体(ES-Ab)ELISA试剂盒 ，英文名： ES-Ab ELISA Kit

(L-半胱酸)  Mouseendotoxin,ETELISA试剂盒小鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Kainicacidmonohydrate2-羧甲基-3-异基脯酸500克BR，90%  ELISAKitTNF-α豚鼠肿瘤坏死因子α规格：48T/96T

丁酰录;录化正丁酰 Butyryl chloridq;Butcnoyl chloridq;Butyroyl chloridq 141-72-3  Chickenglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISAKit鸡神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

无水化钙 Calcium chloride (cell culture tested,... 10043-52-4 100G 通用试剂  人肌酐(Cr)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

注意事项：

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。