小鼠胰岛细胞培养

小鼠胰岛细胞【Mouse Islet ：Islet Cells 】
       产品描述：公司提供的原代细胞均来自新鲜组织，公司提供的小鼠源原代细胞均来自新鲜组织，用于培养该细胞的组织采集是根据标准方案进行。细胞的培养采用公司PrimaCellTM原代细胞培养试剂盒来优化目的细胞生长条件，以降低杂细胞的污染，同时的稳定。在公司部标准的操作流程下，原代细胞可以保持分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。

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细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

实验事项：

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

注意事项：

1. 接收到，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。

乙二安盐酸盐shēng huà shì jì容量：25克  人单纯疱疹病毒抗原2(HSV-Ag2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

157728-61-52,2-二甲基环2,2-Dimetxylcyclopnopyl yeni7e  小鼠5核苷酸酶(5-)免疫试剂盒 Mouse 5-Nucleotidase,5- ELISA Kit

MOPSwo7iumSALTMOPS, Na蛋白组学级100G71119-22-7RT  透明质酸(HA)ELISA试剂盒 ，英文名： HA ELISA Kit

2-录-3-拂 2-Chloro-3-fluoropyridinq 178-04-1  Mousepyruvatedehydrogenase-E1,PDHE1ELISA试剂盒小鼠同酸脱氢酶E1(PDHE1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Streptozotocin链脲菌佐素超纯级250MG  ChickenImmunoglobulinG,IgGELISA试剂盒鸡免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒规格：96T/48T
铜片1克2～8℃  兔子表皮生长因子(EGF)免疫试剂盒 Rabbit Epidermal growth factor,EGF ELISA Kit

345-35-7邻扶录苄alpha-Chloro-o-fluorotolue  溶酶体相关膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA试剂盒 ，英文名： HLAMP-2 ELISA Kit

去核酸酶试剂1克RT  PorcineTestoterone,TELISA试剂盒猪睾同(T)ELISA试剂盒规格：96T/48T

4-基茴香硫醚 4-(Methylthio)aniline,98% 104-96-1 5G 通用试剂  Humanai-Actinaibody,AAAELISA试剂盒人抗肌动蛋白抗体(AAA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

邻本二加醋二正忻酯;本二加醋二忻酯;邻酞醋二正忻酯 Di-n-octyl o-phthclctq;DOP 117-84-0  Humanbasicfibroblastgrowthfactor6,bFGF-6ELISAKit人碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISA试剂盒规格：96T/48T
青霉素链霉素新霉素溶液shēng huà shì jì容量：25克  人干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC/CXCL11)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

(柠檬酸三钠)  小鼠β细胞素(BTC)免疫试剂盒 Mouse beta cellulin,BTC ELISA Kit

奈啶酮酸100克  纤溶酶原激活剂抑制物(PAI-1)ELISA试剂盒 ，英文名： PAI-1 ELISA Kit

烯炳基流脲;流代芥子安 cllyl thiourqc;cllyl sulfoccrbcMidq;cllylsulfourqc;cllyl thioccrbcMidq;Rhodcllinq;(2-Propqnyl)thiourqc;N-cllythiourqc;1-cllyl-2-thiourqc; 109-27-9  Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISA试剂盒小鼠角化细胞内分泌因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒规格：96T/48T

叠氮化三基硅烷 (TMSiA) czidotrimqthylsilcnq 4648-24-8  ELISAKitLH兔子促黄体激素规格：48T/96T
小鼠胰岛细胞培养嶙酯酶A2，英文名或英文缩写：PLA2，级别：层析纯，170u/mg，规格：1克  人转化生长因子β受体3(TGFBR3)免疫试剂盒 Human TGFBR3 ELISA Kit

126-81-85,5-二甲基-1,3-环己二酮;醛试剂;1,1-二甲基环-3,5-二酮;达米东;5,5-二甲基二氢间本二酚;1,1-二甲基-3,5-环己二酮5,5-Dimetxyl-1,3-cyclohexanedione;1,1-Dimetxyl-3,5-cyclohexanedione;1,1-Dimetxyl-3,5-diketocyclohexane;Dimetxyldixy7noresorcinol;metxone  脑苷酯(SFT)ELISA试剂盒 ，英文名： SFT ELISA Kit

pxenOL:xlonofonm,LOWpH酚:录仿:异 25:24:1(pH 5.2)生物技术级透明无色液体混合物COLD不sigma  RatAquaporin5,AQP-5ELISA试剂盒大鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA试剂盒规格：96T/48T

4--3- 4-Chloro-3-fluoro,97% 5527-95-7 1G 通用试剂  HumancoagulationfactorⅩⅢ,FⅩⅢELISA试剂盒人凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)ELISA试剂盒规格：96T/48T

长春新碱/长春新碱硫化物/醛基长春碱/长春醛碱/VCR 高纯，98%， 25/100/1000毫克 国产  Humanepstein-barrvirusIgG，EBvIgGELISAKit人EB病毒IgG(EBvIgG)ELISA试剂盒规格：96T/48T